vWF-FVⅢ結(jié)合試驗(yàn)的建立與vWF基因G2805A多態(tài)性的研究.pdf

1、 本研究采用ELISA的方法成功地建立了此項(xiàng)試驗(yàn)，并對(duì)其臨床應(yīng)用進(jìn)行了探討。通過30名正常人得到vWF的FⅧ結(jié)合率的正常值范圍(FⅧBC/vWF：Ag=1.10±0.34)，血友病A、1型和3型vWD均在此正常值范圍內(nèi)，而確診的兩例2N型vWD病人，此比值均小于0.4。ELISA法vWF-FⅧ結(jié)合試驗(yàn)的建立，能夠?qū)?N型vWD進(jìn)行確診，并可將其與血友病A和1型vWD進(jìn)行鑒別診斷，故具有重要的臨床意義。vWF基因龐大且復(fù)雜，全長(zhǎng)17

2、8kb，含52個(gè)外顯子和51個(gè)內(nèi)含子，其mRNA長(zhǎng)約8.7kb，在22號(hào)染色體上還存在一vWF假基因，且vWD的致病機(jī)制又極其復(fù)雜，這給vWD的直接基因診斷帶來了困難，因此對(duì)于vWD家系的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷仍需主要借助vWF基因的連鎖分析來進(jìn)行間接基因診斷。vWF基因是人體內(nèi)最具多態(tài)性的基因之一，目前已發(fā)現(xiàn)40余種多態(tài)性位點(diǎn)，并且其中一些指標(biāo)可用于vWD家系的基因連鎖分析。 本研究應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性梯度凝膠電泳(PCR-D

3、GGE)技術(shù)結(jié)合NlaⅣ限制性核酸內(nèi)切酶分析，研究了60名中國(guó)漢族人120條染色體vWF基因G2805A的等位基因頻率和雜合情況，并對(duì)28例DGGE電泳行為異常中的4例進(jìn)行了DNA序列分析，結(jié)果表明此多態(tài)性在中國(guó)漢族人群中具有較高的理論雜合率(0.39)，其等位基因發(fā)生頻率分別為0.73(G)和0.27(A)，可用于vWD的基因連鎖分析，并且此特點(diǎn)與歐美白種人具有明顯的差異。此多態(tài)性指標(biāo)可以作為vWD的遺傳分析指標(biāo)之一，用于vWD家系的