用定點(diǎn)突變及基因轉(zhuǎn)染方法建立EBV體外感染細(xì)胞模型.pdf

1、該文進(jìn)行如下研究: (一)利用寡核苷酸介民的基因定點(diǎn)突變技術(shù)先后在小鼠CR2受體基因中引入了P15S和T68Y兩個(gè)特定突變,并經(jīng)測(cè)序證實(shí).(二)采用體外基因重組技術(shù)構(gòu)建了含有野生型和突變小鼠CR2基因以及人 CR2基因cDNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒真核表達(dá)載體(pLXN-wtmCR2/1、pLXSN-mtmCR2/1、pLXSN-hCR2),使目的基因的表達(dá)受到異源性MMLV-LTR中強(qiáng)啟動(dòng)子的調(diào)控.(三)從B95-8細(xì)胞中抽提EB病毒并采用 臍

2、帶血轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)對(duì)其滴度進(jìn)行鑒定,結(jié)果顯示病毒活性好,尤以10<'-2>和10<'-3>兩個(gè)滴度的病毒活性最好.(四)利用MouseAtlascDNAExpressionArrays, 作者進(jìn)一步對(duì)EB病毒進(jìn)入細(xì)胞前后以及TPA處理細(xì)包前后細(xì)胞基因表達(dá)譜進(jìn)行了研究.(五)采用生物信息學(xué)對(duì)突變前后小鼠SCR1-2二給結(jié)構(gòu)及三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè),預(yù)測(cè)結(jié)果提示突變對(duì)小鼠SCR1-2的二級(jí)與三級(jí)結(jié)構(gòu)均有明顯的影響,三級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)結(jié)果更說(shuō)明突變后的小鼠S