基于T細(xì)胞表位的HBV DNA疫苗及結(jié)核桿菌熱休克蛋白70的佐劑功能的研究.pdf

1、盡管預(yù)防性亞單位重組乙肝疫苗和一些治療性藥物在臨床上已經(jīng)廣泛的應(yīng)用，乙肝病毒(HepatitisBVirus，HBV)感染目前仍然是嚴(yán)重一個(gè)威脅人類健康的尚未攻克的疾病。由于DNA疫苗具有誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫的獨(dú)特的能力，因此為預(yù)防和治療HBV感染提供了一個(gè)新的發(fā)展方向。 近年來進(jìn)行的Ⅰ期臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明HBVDNA疫苗可以在健康人群中誘導(dǎo)保護(hù)性反應(yīng)；在慢性HBV感染人群中可以誘導(dǎo)特異性的T細(xì)胞反應(yīng)和清除HBVDNA。然而，這

2、些臨床實(shí)驗(yàn)中使用的HBVDNA疫苗只編碼單一的抗原蛋白——S抗原或PreS2/S抗原。而且由于DNA疫苗獨(dú)特的抗原表達(dá)和遞呈途徑，它的免疫原性仍然需要進(jìn)一步的改進(jìn)。因此，我們根據(jù)HBV表面抗原(HBsAg)上的T細(xì)胞表位，設(shè)計(jì)了一個(gè)包含多個(gè)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)表位和輔助性T細(xì)胞(Th)表位的多表位DNA疫苗，并研究了它的功能，同時(shí)研究了結(jié)核桿菌熱休克蛋白(HeatShockProtein，HSP)HSP70的分子佐劑功能。

3、結(jié)果表明，在H-2d和H-2b小鼠模型中，多表位HBVDNA疫苗誘導(dǎo)了一個(gè)比單一抗原基因的HBsAgDNA疫苗更強(qiáng)的HBsAg特異性CTL反應(yīng)。然而，在H-2d小鼠模型中，Dd-限制性表位的CTL反應(yīng)明顯弱于Ld-限制性表位的CTL反應(yīng)。HSP70作為分子佐劑可以明顯改善多表位DNA疫苗的有效性。當(dāng)HSP70融合多表位抗原時(shí)，不僅HBsAg抗原特異性的CTL反應(yīng)被增強(qiáng)了，而且各個(gè)表位特異性(Ld、Kd和Kb)的CTL反應(yīng)也明顯的增強(qiáng)了。

4、在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型中，多表位DNA疫苗免疫可以明顯的清除血液中的HBsAg，并顯著下調(diào)了HBVDNA的水平。因此，我們的研究表明基于T細(xì)胞表位的多表位DNA疫苗在治療慢性HBV感染方面是一個(gè)可以考慮的方案。 以往的研究表明，盡管HSP70可以改善DNA疫苗的有效性，但是由于HSP70是一個(gè)高度進(jìn)化保守的分子，因此有引起自身免疫反應(yīng)的可能性。在這個(gè)研究中，我們選擇了兩個(gè)截短的HSP70分子——N’-端的HSP701-360和C

5、’-端HSP70359-610，研究它們對(duì)于HBVDNA疫苗引起的抗原特異性的免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，只有HSP70359-610融合的HBVDNA疫苗誘導(dǎo)了一個(gè)增強(qiáng)的HBsAg特異性的抗體反應(yīng)，同時(shí)，這個(gè)融合疫苗并沒有誘導(dǎo)HSP70的抗體反應(yīng)。有趣的是，HSP70359-610不僅僅調(diào)節(jié)了HBsAg特異性的CTL反應(yīng)，還在H-2d小鼠模型中，明顯增強(qiáng)了Ld-限制性表位的CTL反應(yīng)和Dd-限制性表位的CTL反應(yīng)。同時(shí)，HSP7