大黃湯劑蒽醌類成分測定及其在顱腦損傷中的應(yīng)用.pdf

1、目的：采用超高效液相色譜方法對(duì)大黃湯劑蒽醌類成分番瀉苷B、番瀉苷A、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚進(jìn)行同步定性、定量測定；并檢測創(chuàng)傷性顱腦損傷患者鼻飼大黃湯劑后腦脊液中的蒽醌類可吸收成分，為大黃抗顱腦損傷質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的確定奠定基礎(chǔ)；再以該蒽醌類可吸收成分作為干預(yù)因素，探討其對(duì)創(chuàng)傷性顱腦損傷模型大鼠腦皮質(zhì)超氧化物歧化酶活力（superoxidase dismutase，SOD）的影響，以探索大黃對(duì)顱腦外傷的腦保護(hù)作用。

2、r>　　 方法：
　　 （1）采用超高效液相色譜方法，色譜柱為UPLC BEH C18色譜柱（2.1×50mm，1.7μm），以甲醇-0.5％乙酸為流動(dòng)相，流量為0.5ml/min，探測波長為254納米，對(duì)大黃湯劑番瀉苷B、番瀉苷A、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚等7種蒽醌類成分同步進(jìn)行測定；
　　 （2）選擇符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的創(chuàng)傷性顱腦損傷患者，于鼻飼大黃湯劑4小時(shí)后行腰椎穿刺術(shù)，收集患者腦脊液，采用上述

3、超高效液相色譜方法檢測創(chuàng)傷性顱腦損傷病人腦脊液中蒽醌類成分。
　　 （3）將創(chuàng)傷性顱腦損傷病人腦脊液中所檢測出的蒽醌類有效成分進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，用30只Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組和治療組（每組10只），治療組及模型組復(fù)制創(chuàng)傷性顱腦損傷SD大鼠模型，假手術(shù)組SD大鼠予開骨窗，不打擊。治療組給予大黃素甲醚（40mg/kg）灌胃，假手術(shù)組及模型組給予等量生理鹽水灌胃，于灌胃24小時(shí)后處死，取得腦皮質(zhì)，采用羥胺

4、法檢測大鼠腦皮質(zhì)SOD活力。
　　 結(jié)果：
　　 （1）大黃湯劑中蒽醌類成分分別為：番瀉苷B線性范圍為0.255～16.304μg/ml（r=0.9994），平均回收率為97.57％（RSD=3.12％）；番瀉苷A線性范圍為0.177～11.286μg/ml（r=0.9995），平均回收率為98.04％（RSD=2.84％）；蘆薈大黃素線性范圍為0.198～12.666μg/ml（r=0.9986），平均回收率為99.6

5、6％（RSD=1.15％）；大黃酸線性范圍為0.210～26.858μg/ml（r=0.9997），平均回收率為100.12％（RSD=2.17％）；大黃素線性范圍為0.285～36.428μg/ml（r=0.9984），平均回收率為102.24％（RSD=1.25％）；大黃酚線性范圍為0.386～24.642μg/ml（r=0.9996），平均回收率為98.86％（RSD=2.68％）；大黃素甲醚線性范圍為0.268～17.142μg

6、/ml（r=0.9964），平均回收率為97.89％（RSD=2.46％）。其中大黃酸質(zhì)量濃度（20.223±0.708μg/ml）最大，大黃酚質(zhì)量濃度（3.101±0.167μg/ml）最低，各成分定量結(jié)果均在線性范圍之內(nèi)。
　　 （2）創(chuàng)傷性顱腦損傷病人鼻飼大黃湯劑后腦脊液中檢測出大黃有效蒽醌類成分為大黃素甲醚。
　　 （3）該有效成分進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，SD大鼠腦皮質(zhì)SOD活力在假手術(shù)組（19.918±1.067U/

7、mgprot）較模型組（18.757±1.821U/mgprot）顯著增高（p＜0.05），治療組（22.083±2.578U/mgprot）較假手術(shù)組顯著增高（p＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 （1）超高效液相色譜方法同步測定大黃湯劑7種蒽醌類成分，該方法學(xué)具有快速、簡單、靈敏、精確和有效的特點(diǎn)。
　　 （2）發(fā)現(xiàn)大黃湯劑有效成分-大黃素甲醚為創(chuàng)傷性顱腦損傷患者腦脊液中可吸收的有效生物成分，該成分可能為大黃