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文檔簡介
1、背景
阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease,AD),又稱老年癡呆,是老年人群癡呆的最常見、最重要的類型。臨床主要表現(xiàn)為進(jìn)行性的記憶力減退,認(rèn)知功能障礙等癥狀。其患病率隨年齡增加而增高,隨著我國及世界人口結(jié)構(gòu)日益趨向老齡化,AD的發(fā)病率逐年上升,嚴(yán)重危害老年人的身心健康和生活質(zhì)量,給病人造成巨大的痛苦,給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān),已成為嚴(yán)重的社會問題,引起了普遍關(guān)注。
阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制尚不明
2、確,目前對其治療也沒有行之有效的方法。研究顯示疾病的發(fā)生與其病理學(xué)改變有關(guān),其特征性病理改變主要表現(xiàn)為:神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFT)、細(xì)胞外老年斑或神經(jīng)炎性斑(senile plaque,SP)的形成及神經(jīng)細(xì)胞的過度凋亡。神經(jīng)纖維纏結(jié)主要由高度磷酸化的Tau蛋白沉積所致;老年斑則主要是由β淀粉樣肽(β-amyloid peptide,Aβ)沉積引起的,并進(jìn)一步引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
3、> 嘌呤霉素敏感的氨肽酶(puromycin-sensitive aminopeptidase,PSA/NPEPPS)是一種廣泛分布的金屬氨肽酶,在腦中含量很豐富。Constam等研究發(fā)現(xiàn)PSA具有蛋白水解作用,在有絲分裂期與紡錘體微管的形成有關(guān),并且PSA的抑制劑能引起細(xì)胞的凋亡。此外PSA對于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、主要組織相容性復(fù)合物Ⅰ(MHCⅠ)的處理、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、胚胎發(fā)育都有重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)PSA可以降解Ta
4、u蛋白,改善AD的癥狀,為以Tau蛋白為靶標(biāo)治療AD提供了新思路——Tau蛋白降解劑。作為AD病理學(xué)改變之一的Aβ沉積,與Tau蛋白異常過度磷酸化及神經(jīng)細(xì)胞的凋亡密切相關(guān),但是Aβ與PSA之間的關(guān)系卻很少有人研究。本研究試圖探討Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡與PSA之間的關(guān)系。
目的:
在SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)沉默PSA表達(dá)、PC12細(xì)胞內(nèi)上調(diào)PSA表達(dá)的基礎(chǔ)上,加入Aβ25-35誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,研究PSA對Aβ誘導(dǎo)的神
5、經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響,進(jìn)一步探討PSA作為一種潛在的AD治療藥物的分子機(jī)制。
方法:
1.采用MTT法、Hoechst染色檢測不同濃度(0、10、20、30μmol/L)的Aβ25-35對SH-SYSY、PC12細(xì)胞的影響:MTT法檢測對細(xì)胞生長的影響;Hoechst染色檢測對細(xì)胞核形態(tài)的影響,從而確定最佳濃度的Aβ25-35來誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。
2.采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法在SH-SY5Y細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PS
6、A-siRNA,在PC12細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PSA重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染24h后,加20μmol/L的Aβ25-35處理細(xì)胞。SH-SY5Y細(xì)胞分組為:A:NC組,B:NC+Aβ25-35組,C:PSA-siRNA組,D: PSA-siRNA+Aβ25-35組;PC12細(xì)胞分組為: E:空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,F(xiàn):空質(zhì)粒+Aβ25-35組,G:PSA過表達(dá)組,H:PSA過表達(dá)+Aβ25-35組。
加入Aβ25-35作用24h后收集各組細(xì)胞,(a
7、)進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;(b) Western blot檢測PSA、caspase-3蛋白的表達(dá)情況;(c)酶標(biāo)儀檢測caspase-3活性。
結(jié)果:
1.Aβ25-35抑制SH-SY5Y細(xì)胞、PC12細(xì)胞增殖,細(xì)胞核發(fā)生細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變,確定20μmol/L的Aβ25-35作用24h進(jìn)行實(shí)驗(yàn);
2.在SH-SY5Y細(xì)胞中,沉默PSA表達(dá)能使Aβ25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率升高,促進(jìn)c
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