銀杏制劑對糖尿病患者血清誘導的內(nèi)皮細胞β淀粉樣肽表達的影響.pdf

1、觀察糖尿病血清(Diabetic serum，DS)對銀杏葉提取物(Ginkgobiloba extract，GBE)、銀杏內(nèi)酯(Ginkgolides B，GB)和阿托伐他汀(Atovastatin，AT)預處理的血管內(nèi)皮細胞的損傷作用和β-淀粉樣肽(Amyloid-β，Aβ)的變化，探討DS引起內(nèi)皮細胞損傷的機制及GBE和GB的保護作用，為內(nèi)皮保護策略防治糖尿病血管并發(fā)癥提供實驗依據(jù)。 方法： DS對不同藥物預處理的

2、ECV-3 04細胞的損傷效應及評定。用GBE、GB和AT預處理ECV-304細胞24h，然后加入10﹪的DS，分別稱為GBE組、GB組和AT組，同時設(shè)糖尿病血清組(DS)。 30min、3h以及72h倒置顯微鏡觀察形態(tài)學變化；四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測3d時細胞增殖情況：各時間點上清液中檢測乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)評定細胞膜損傷程度、檢測丙二醛(Maleicdialdehyde，MD

3、A)評定脂質(zhì)過氧化情況以及檢測一氧化氮(Nitric oxide，NO)了解內(nèi)皮功能。 采用ELIsA方法檢測上述各時間點細胞培養(yǎng)上清液中的AB40和AB42，探討DS誘導內(nèi)皮損傷機制及GBE和GB的保護機制。 結(jié)果： 1.糖尿病血清對不同藥物預處理的ECV-304細胞的損傷效應及評定。細胞形態(tài)：30min及3h各組無明顯變化，3d DS組可見細胞變圓、皺縮和胞體碎裂，排列紊亂，數(shù)量減少；AT組無明顯變化；GB和

4、GBE組呈現(xiàn)明顯的保護作用，可見內(nèi)皮細胞為多角形，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，大小均勻，呈單層鵝卵石狀緊密排列。細胞生存率(﹪)，30min和3h各組無顯著性差異；3d GBE(119.5±1.6，P<0.001)、GB(108.8±1.9，P<0.01)和AT(120.4±3.7，P<0.01)與DS組(96.7±2.1)比較均明顯增高，以GBE和AT為著(P<0.001)。 LDH水平(U/L)，30min各組無顯著性差異(P>0.05)

5、；3h和3d，GBE(770.6±40.5，P<0.01；912.2±34.2，P<0.05)、GB(861.1±36.5，P<0.05：955±29.8，P<0.05)與DS組(1054±38.9，1211±54.32)比較均顯著降低，AT(896.1±43.6，1060.9±38.3)與DS組比較無明顯降低(P>0.05)。 MDA含量(μ M)，30min各組無顯著性差異(P>0.05)：3h和3d，GBE(7.76±0.

6、42，P<0.05；6.47±0.45，P<0.01)、GB(8.90±0.17，P<0.05：8.24±0.37，P<0.01)、AT(7.95±0.37，P<0.05；7.95±0.42，P<0.01)與DS(9.52±0.13，12.43±O.62)組比較均顯著降低，以GBE為著。 NO水平(μ M)，30min各組無顯著性差異(P>0.05)：3h：GBE(93.8±11，P<0.01)、GB(144.2±19，P<0.

7、01)、AT(147.2±21，P<0.01)與DS(50.2±1.9)組比較NO濃度升高；72h：GBE(65.9±0.7，P<0.05)、AT(71.3±2.8，P<0.05)與DS(41.25±6.4)組比較NO濃度升高，GB(38.8±11，P>0.05)與DS組比較NO無統(tǒng)計學差異。 2.糖尿病血清對不同藥物預處理的ECV-304細胞培養(yǎng)上清中Aβ40和Aβ42濃度的影響。 DS組Aβ42濃度(pM)(7.43

8、±0.25，P<0.001；7.51±0.20，P<0.001；11.64±0.19，P<0.001)較糖尿病血清(0.52+0.05)明顯增多。Aβ40濃度(pM)(9.66±0.21，P<0.001；11.19±0.53，P<0.001；55.24±0.27，P<0.001)較糖尿病血清(0.74±0.05)也是明顯增多。 Aβ42濃度(pM)，GBE(2.37±0.17，P<0.001：2.34±0.11，P<0.001；

9、2.7±0.10，P<0.001)、GB(2.37±0.15，P<0.001；4.1±0.17，P<0.001：5.7±0.19，P<0.001)及AT組(5.29±0.23，P<0.001；5.2±0.09，P<0.001；4.9±0.17，P<0.001)較DS組(7.41±0.25，7.51±0.11，11.6±0.11)明顯降低。GBE和GB較AT組明顯降低，以GBE更著。 AB40濃度(pM)，GBE(0.27±0.0

10、6，P<0.001；3.68±0.22，P<0.001；36.4±0.22，P<0.001)、GB(0.18±0.14，P<0.001；4.94±0.20，P<0.001；43.1±0.22，P<0.001)及AT組(2.81±0.12，P<0.001；9.63±0.21，P<0.001；38.9±0.14，P<0.001)較DS組(9.74±0.43，9.58±0.16，55.2±0.16)明顯降低，以GBE更著。結(jié)論： 1.