eIF4E和VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、[研究背景]
　　 子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，Ems)，簡(jiǎn)稱為內(nèi)異癥，是指具有生長(zhǎng)能力的活性子宮內(nèi)膜在子宮腔以外的部位異常種植生長(zhǎng)。它是育齡婦女的常見(jiàn)病、多發(fā)病，嚴(yán)重困擾著育齡女性的身心健康，受到人們的日益重視。發(fā)病率高達(dá)10％～15％，文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)。目前有關(guān)Ems的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，至今文獻(xiàn)報(bào)道有多種學(xué)說(shuō)，被廣泛接受的傳統(tǒng)的三種學(xué)說(shuō)為:子宮內(nèi)膜種植學(xué)說(shuō)、體腔上皮化生學(xué)說(shuō)及淋巴靜脈播散學(xué)說(shuō)，但

2、傳統(tǒng)的學(xué)說(shuō)均存在一定的局限性，不能完全解釋Ems的發(fā)病機(jī)制。近年來(lái)，隨著免疫學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)Ems的基礎(chǔ)研究進(jìn)入到了更深的層次，有關(guān)Ems的病因?qū)W在免疫學(xué)機(jī)制、血管生成機(jī)制、細(xì)胞抗凋亡機(jī)制、遺傳易感性、環(huán)境因素、細(xì)胞外基質(zhì)等方面取得了較大的進(jìn)展，這些病因?qū)W說(shuō)的提出為Ems的發(fā)病機(jī)理、發(fā)生發(fā)展及治療策略開(kāi)辟了新的研究領(lǐng)域，特別是血管生成機(jī)制的提出為Ems的抗血管生成治療奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。
　　 血管生成這一概念最早

3、于1935年Hertig在觀察胎盤組織新生血管形成的過(guò)程中首先采用。而對(duì)血管生成過(guò)程的深入研究卻緣于1971年Folkman等對(duì)實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)的研究，同時(shí)他還提出了“腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移都依賴于新生血管形成”這一概念，現(xiàn)這一觀點(diǎn)在學(xué)術(shù)界已達(dá)成共識(shí)。新生血管生成在多種腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用，以新生血管為作用靶點(diǎn)的抗血管生成治療也是近年腫瘤靶向治療的熱點(diǎn)，且文獻(xiàn)報(bào)道其療效顯著。Ems雖為良性疾病，卻具有浸潤(rùn)生長(zhǎng)、種植轉(zhuǎn)移及容易復(fù)

4、發(fā)等類似腫瘤的惡性生物學(xué)行為，新生血管生成在Ems的發(fā)生發(fā)展同樣作用顯著。婦產(chǎn)科專家郎景和院士也指出“異位內(nèi)膜必須突破腹水、腹腔細(xì)胞及腹腔細(xì)胞外基質(zhì)三道防線，完成粘附、侵襲及血管生成才能在盆腹腔表面成功種植生長(zhǎng)”，即Attachment-Aggression-Angi--ogenesis(3A三部曲學(xué)說(shuō))，該學(xué)說(shuō)證實(shí)了血管生成在Ems發(fā)病中的重要地位。
　　 血管生成過(guò)程受局部微環(huán)境、體內(nèi)激素、血管生成相關(guān)因子、癌基因和抑癌基因

5、等共同調(diào)控，局部血管形成因子與抑制因子是否平衡及血管內(nèi)皮細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)是否協(xié)調(diào)決定了異位內(nèi)膜是否能種植、侵襲及轉(zhuǎn)移?？寺『丸b定出來(lái)的與血管生成相關(guān)的因子有30多種，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)是鑒定出來(lái)的最關(guān)鍵的血管生成因子。VEGF是1989年Ferrarra在牛垂體濾泡星狀細(xì)胞培養(yǎng)液中分離純化出來(lái)的一類糖蛋白，在生理性、病理性的血管形成中均發(fā)揮強(qiáng)烈作用。VEGF通

6、過(guò)與其受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)級(jí)聯(lián)通路，調(diào)控細(xì)胞的增殖、遷移、存活，改變細(xì)胞的通透性等，從而刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、移位，增加血管通透性，誘導(dǎo)新生血管形成。
　　 真核細(xì)胞翻譯起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)為一種新的腫瘤標(biāo)志物，在蛋白質(zhì)翻譯的調(diào)節(jié)中起中心作用，其過(guò)度表達(dá)選擇性地加強(qiáng)加強(qiáng)一些惡性蛋白的表達(dá)，如血管生成相關(guān)蛋白(VEGF、成纖維生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β)、

7、細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白(cyclin D(1)、c-myc基因產(chǎn)物)以及細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白(MMPs等)等。VEGF便是eIF4E上調(diào)的重要因子之一，兩者的聯(lián)合作用在血管生成中作用顯著。因此，eIF4E作為蛋白質(zhì)翻譯過(guò)程中關(guān)鍵因子，VEGF作為血管生成過(guò)程中的關(guān)鍵因子，兩者過(guò)量表達(dá)在Ems發(fā)生發(fā)展及種植轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮重要作用。
　　 [研究目的]
　　 采用SP免疫組化檢測(cè)正常內(nèi)膜、Ems患者在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜中eIF4E和VE

8、GF蛋白的表達(dá)情況，探討eIF4E和VEGF的表達(dá)與Ems臨床特征的關(guān)系，分析eIF4E和VEGF在Ems中的表達(dá)是否相關(guān)，為Ems早期診斷及靶向治療提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。
　　 [材料與方法]
　　 1.臨床資料
　　 實(shí)驗(yàn)組:隨機(jī)選取2010年9月至2011年5月在南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院行腹腔鏡或開(kāi)腹手術(shù)、病理檢查確診的內(nèi)異癥患者30例為實(shí)驗(yàn)組，取其異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織。實(shí)驗(yàn)組患者平均年齡31.2±7.

9、8歲;增生期18例，分泌期12例;按r-AFS(Revised American Fertility Society,美國(guó)生育協(xié)會(huì)修正分期法)分期:Ⅰ期3例，Ⅱ期8例，Ⅲ期13例，Ⅳ期6例。
　　 對(duì)照組:選取同期在我院婦產(chǎn)科因“單純子宮肌瘤”行腹腔鏡子宮全切術(shù)的4例患者以及因“原發(fā)性或繼發(fā)性不孕癥”行腹腔鏡檢查術(shù)的16例患者，共20例患者作為對(duì)照組。子宮肌瘤患者剖開(kāi)切除的子宮于宮底部獲取少量子宮內(nèi)膜，不孕癥患者于術(shù)中行刮宮術(shù)刮

10、取少量新鮮子宮內(nèi)膜，此為正常內(nèi)膜組。刮取的子宮內(nèi)膜均由病理證實(shí)為正常的子宮內(nèi)膜。
　　 2.方法
　　 先行HE病理形態(tài)學(xué)觀察，明確切片是否能納入實(shí)驗(yàn)，同時(shí)確定各組內(nèi)膜月經(jīng)周期分期。SP免疫組化法檢測(cè)三組內(nèi)膜中eIF4E、VEGF蛋白的表達(dá)情況。
　　 3.結(jié)果判讀
　　 以細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)。用image pro-plus6.0專業(yè)圖像分析軟件對(duì)eIF4E及VEGF蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行

11、半定量分析，計(jì)算出每張切片中蛋白表達(dá)的平均光密度值(mean optical density, MOD)，MOD=sum(IOD)/sum(area)。MOD值越高，蛋白表達(dá)越強(qiáng)。
　　 4.統(tǒng)計(jì)方法
　　 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)。采用方差分析法或非參數(shù)檢驗(yàn)法分析eIF4E、VEGF在三組內(nèi)膜中的表達(dá)是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，同樣方法分析eIF4E、VEGF的表達(dá)與Ems臨床特征的關(guān)系，eIF4E和VEGF的相

12、關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1.3組內(nèi)膜中eIF4E的表達(dá)
　　 1.1.表達(dá)部位eIF4E主要定位于腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞漿，呈棕黃色彌漫性分布。異位內(nèi)膜組腺體強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，間質(zhì)微弱表達(dá);在位、正常內(nèi)膜組腺體弱陽(yáng)性表達(dá)，間質(zhì)無(wú)明顯表達(dá)。
　　 1.2.表達(dá)強(qiáng)弱eIF4E在異位、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜中的MOD值分別為0.222±0.039、0.154±

13、0.015和0.109±0.018。兩兩比較eIF4E表達(dá)的強(qiáng)弱依次為異位內(nèi)膜＞在位內(nèi)膜＞正常內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=62.91，P=0.000)。
　　 2.3組內(nèi)膜中VEGF的表達(dá)
　　 2.1.表達(dá)部位VEGF主要定位于腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞漿及細(xì)胞膜中，呈棕黃色彌漫性分布。異位內(nèi)膜組腺體強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，間質(zhì)微弱表達(dá);在位、正常內(nèi)膜組腺體弱陽(yáng)性表達(dá)，間質(zhì)無(wú)明顯表達(dá)。
　　 2.2.表達(dá)強(qiáng)弱VEGF在異位、在位內(nèi)

14、膜及正常內(nèi)膜中的MOD值分別為0.195±0.050，0.131±0.021，0.084±0.019。兩兩比較VEGF表達(dá)的強(qiáng)弱依次為異位內(nèi)膜＞在位內(nèi)膜＞正常內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( x2=62.91，P=0.000)。
　　 3.表達(dá)與內(nèi)膜分期的關(guān)系正常內(nèi)膜、在位內(nèi)膜中eIF4E、VEGF在分泌期的表達(dá)高于增生期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=10.59，P=0.004; F=6.967，P=0.013)。
　　 4.表達(dá)與r

15、-AFS臨床分期的關(guān)系eIF4E的表達(dá)與Ems患者r-AFS臨床分期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Ems患者VEGF表達(dá)Ⅲ-Ⅳ期明顯高于Ⅰ-Ⅱ期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02)。
　　 5.eIF4E與VEGF兩者表達(dá)的相關(guān)性異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜組eIF4E與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.871，P＜0.01;r=0.798，P＜0.01），正常內(nèi)膜中eIF4E及VEGF的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.296，P=0.205)。
　　 [

16、結(jié)論]
　　 1.在位內(nèi)膜eIF4E及VEGF的表達(dá)較正常內(nèi)膜發(fā)生了明顯的改變，提示Ems在位內(nèi)膜已具有與正常內(nèi)膜不同的生物學(xué)特征，在位內(nèi)膜生物學(xué)行為的改變可能是Ems發(fā)生的一個(gè)重要原因，使其更容易在盆、腹腔表面種植生長(zhǎng)，這也在一定程度上佐證了“在位內(nèi)膜決定論”。
　　 2.異位內(nèi)膜中eIF4E及VEGF蛋白的表達(dá)較在位內(nèi)膜、正常內(nèi)膜中表達(dá)顯著性增加，提示兩者可能促進(jìn)異位病灶的粘附、浸潤(rùn)及血管生成，促進(jìn)Ems的發(fā)生、發(fā)展

17、。
　　 3.eIF4E、VEGF在Ems患者異位和在位內(nèi)膜表達(dá)呈正相關(guān)，正常內(nèi)膜中表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)，提示eIF4E可能通過(guò)促進(jìn)VEGF分泌而發(fā)揮促血管生成作用，兩者在Ems的血管生成中有相互促進(jìn)作用。
　　 4.eIF4E、VEGF在正常內(nèi)膜及在位內(nèi)膜中的表達(dá)分泌期高于增生期，提示分泌期內(nèi)膜生物活性高，血管生成能力強(qiáng)，隨經(jīng)血逆流至腹腔后更容易粘附種植。
　　 5.eIF4E表達(dá)與Ems的r-AFS臨床分期無(wú)顯著性