進(jìn)展性結(jié)直腸腺瘤再發(fā)相關(guān)分子的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:進(jìn)展性結(jié)直腸腺瘤(ACRA)是結(jié)直腸癌(CRC)的癌前疾病，早期識(shí)別ACRA再發(fā)是降低CRC發(fā)病率的關(guān)鍵。本課題旨在通過(guò)高通量芯片初篩和臨床樣本驗(yàn)證，尋找ACRA切除術(shù)后腺瘤再發(fā)相關(guān)microRNAs(miRs)，并從miR靶基因角度初步探討了可能影響ACRA再發(fā)的分子機(jī)制。
　　方法:通過(guò)miRmicroarray，檢測(cè)腺瘤再發(fā)進(jìn)展性結(jié)直腸腺瘤(RACRA)和未腺瘤再發(fā)進(jìn)展性結(jié)直腸腺瘤(NRACRA)的miR的差異表達(dá)譜;

2、篩選腺瘤再發(fā)相關(guān)miR，用qRT-PCR分別在福爾馬林固定-石蠟包埋(FFPE)和糞便標(biāo)本中對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，以此評(píng)估FFPE和糞便miR對(duì)ACRA切除術(shù)后腺瘤再發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值。對(duì)已證實(shí)的與腺瘤再發(fā)相關(guān)的miR-194，用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)其靶基因，挑選與腫瘤細(xì)胞的增殖關(guān)系密切的靶基因進(jìn)行研究。應(yīng)用基因干預(yù)方法、熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)、靶基因結(jié)合區(qū)突變實(shí)驗(yàn)確立AKT2為miR-194的靶基因。利用原位雜交(ISH)和免疫組化(ICH)分別在正

3、常結(jié)直腸組織、RACRA和NRACRA的FFPE組織中觀察miR-194和AKT2的表達(dá)，進(jìn)一步驗(yàn)證miR-194和AKT2是否與腺瘤再發(fā)相關(guān)，同時(shí)觀察兩者的負(fù)調(diào)控關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.miR-10a,miR-141,miR-146a,miR-151,miR-194和miR-3607-3p在正常結(jié)直腸組織、NRACRA和RACRA中表達(dá)依次降低，符合腫瘤發(fā)展的規(guī)律，故作為候選miR在臨床隊(duì)列中進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　2

4、.在回顧性隊(duì)列中，miR-194以閾值log10(2。△Ct)≤0.1311為界，能較好地預(yù)測(cè)腺瘤再發(fā)，敏感性和特異性分別為71.0％和78.0％。miR-194低表達(dá)在前瞻性隊(duì)列中同樣具有較好的預(yù)測(cè)能力，敏感性和特異性分別為76.1％和77.2％?；贔FPEmiR-194低表達(dá)、吸煙、飲酒嗜好和CRC一級(jí)親屬是ACRA切除后腺瘤再發(fā)的獨(dú)立高危因素，聯(lián)合后預(yù)測(cè)效率明顯提高，AUC達(dá)0.860。
　　3.miR-194在糞便和FF

5、PE組織中表達(dá)量呈顯著正相關(guān)。同時(shí)，糞便miR-194具有較好的腺瘤再發(fā)的預(yù)測(cè)效率，以閾值log10(2?！鰿t)≤1.0276為界，敏感性和特異性分別為60.0％和88.1％。
　　4.AKT2為miR-194的靶基因。miR-194和AKT2在正常結(jié)直腸組織、NRACRA和RACRA組織中表達(dá)分別依次降低和增高，兩者呈顯著負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:基于FFPE或糞便miR-194低表達(dá)可有效預(yù)測(cè)ACRA切除后腺瘤再發(fā)，在有煙酒