TFH細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子在變應(yīng)性鼻炎小鼠模型中的表達(dá)和意義.pdf

1、第一部分變應(yīng)性鼻炎小鼠動(dòng)物模型的建立
　　目的:建立變應(yīng)性鼻炎小鼠動(dòng)物模型,探討變應(yīng)性鼻炎鼻腔粘膜隨鼻內(nèi)激發(fā)時(shí)間不同的組織學(xué)變化。
　　方法:4~6周齡BALB/c小鼠,用卵清蛋白50μg、氫氧化鋁凝膠5mg加生理鹽水1ml配成混懸液進(jìn)行腹腔注射基礎(chǔ)致敏共7次;5％卵清蛋白生理鹽水滴鼻進(jìn)行鼻腔激發(fā),按組分別連續(xù)激發(fā)10天,20天,30天。對(duì)照組用生理鹽水腹腔注射和滴鼻。觀察小鼠行為學(xué)變化,酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)試外周血OVA-sI

2、gE的水平,HE染色觀察鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況,檢測(cè)結(jié)果采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,組間比較用T檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:造模結(jié)束后小鼠行為學(xué)評(píng)分分別為5.01±1.01、6.43±1.12、8.56±1.64,對(duì)照組0.85±0.23;鼻黏膜內(nèi)EOS計(jì)數(shù)分別為45.91(45.91±5.80)pg/ml、48.81(48.81±3.49)pg/ml、51.38(51.38±3.19)pg/ml,對(duì)照組0.69±0.12

3、;血清OVA-sIgE濃度分別45.91(45.91±5.80)pg/ml、48.81(48.81±3.49)pg/ml、51.38(51.38±3.19)pg/ml,對(duì)照組為41.71(41.71±2.58)pg/ml。T檢驗(yàn)顯示,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間均存在顯著性差異(P﹤0.05),AR模型組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:變應(yīng)性鼻炎小鼠動(dòng)物模型造模成功,隨著鼻內(nèi)激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng),OVA-sIgE濃度和癥狀有升高

4、趨勢(shì)。
　　第二部分TFH細(xì)胞在變應(yīng)性鼻炎小鼠模型外周血中的流式細(xì)胞分析
　　目的:流式細(xì)胞術(shù)分析TFH細(xì)胞在變應(yīng)性鼻炎小鼠模型外周血的變化和意義。
　　方法:變應(yīng)性鼻炎小鼠模型成功建立后,用紅細(xì)胞裂解液處理得到的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)。CD4-Fitc和CXCR5-PE染色后用流式細(xì)胞儀分析檢查外周血的CD4+CXCR5+細(xì)胞的比例,ELISA分析血清總OVA-sIgE水平,用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0作T檢驗(yàn)

5、和Pearson相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:卵清蛋白激發(fā)AR模型組外周血中TFH細(xì)胞占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比分別為7.94±2.66%、8.65±3.49%、9.77±3.24%,對(duì)照組為4.97±0.20%,經(jīng)比較差異有顯著性,前者明顯高于后者(T-test,P<0.05);AR模型組之間的百分比隨著免疫激發(fā)時(shí)間延長(zhǎng)的而增加,經(jīng)比較差異有顯著性(T-test,P<0.05)。Pearson相關(guān)性分析顯示TFH細(xì)胞的表達(dá)水平與總OV

6、A-sIgE水平呈正相關(guān)(r=0.87,P=0.021)。
　　結(jié)論:TFH細(xì)胞在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病中有重要的作用,可能與IgE水平升高有關(guān)。
　　第三部分IL-21在變應(yīng)性鼻炎小鼠模型中的表達(dá)及與TFH之間的關(guān)系
　　目的:探討IL-21分子在變應(yīng)性鼻炎小鼠模型中的表達(dá)及與OVA-sIgE、TFH細(xì)胞的關(guān)系。
　　方法:變應(yīng)性鼻炎BALB/c小鼠造模成功后,ELISA法測(cè)試外周血IL-21、OVA-sIgE的量,流

7、式細(xì)胞術(shù)分析TFH細(xì)胞在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的含量,SPSS16.0中Pearson相關(guān)性分析IL-21分子與各組數(shù)據(jù)之間的聯(lián)系,均數(shù)間的比較用T檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:IL-21在對(duì)照組為186.25±11.68pg/ml,AR模型1組為181.13±4.93pg/ml,AR模型2組為168.46±11.04pg/ml,AR模型3組為164.54±10.52pg/ml。各試驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠外周血IL-21的表達(dá)經(jīng)比較差異有顯著性意義(T

8、-test,P<0.05),試驗(yàn)組IL-21的表達(dá)水平要比正常組低,而且隨著鼻內(nèi)激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng),IL-21的表達(dá)水平逐漸下降;Pearson相關(guān)分析顯示外周血IL-21的表達(dá)水平與CD4+CXCR5+T細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)(r=-0.80,P=0.048),與血清總OVA-sIgE水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.86,P=0.031)。
　　結(jié)論:IL-21與TFH細(xì)胞及OVA-sIgE的含量呈負(fù)相關(guān),臨床上可能對(duì)變應(yīng)性鼻炎有一定的治療作

9、用。
　　第四部分TFH相關(guān)因子在變應(yīng)性鼻炎小鼠模型鼻黏膜中的表達(dá)
　　目的:探討TFH相關(guān)因子CXCR5及Bcl-6在變應(yīng)性鼻炎小鼠模型鼻粘膜中的表達(dá)及可能意義。
　　方法:小鼠變應(yīng)性鼻炎模型造模成功后,用免疫組織化學(xué)方法分析CXCR5在小鼠鼻黏膜中的表達(dá)情況。并用Westernblot和PCR的方法對(duì)TFH關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0處理及比較。
　　結(jié)果:Wester

10、nblot測(cè)試顯示TFH關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組鼻黏膜明顯升高,其相對(duì)密度值分別為0.67、0.84、0.98,而對(duì)照組鼻黏膜為0.53。鼻黏膜適時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)顯示Bcl-6mRNA的表達(dá)也明顯增高,其擴(kuò)增倍數(shù)分別為1.63、1.77、1.85、1.92,而對(duì)照組鼻黏膜為0.90(T-test,P<0.05)。鼻黏膜CXCR5免疫組織化學(xué)分析的結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組鼻黏膜CXCR5+細(xì)胞數(shù)比對(duì)照組鼻黏膜中CXCR5+細(xì)胞數(shù)明顯增多(T-