膽堿能α7受體激動(dòng)劑對(duì)燒沖復(fù)合傷休克期血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：燒沖復(fù)合傷引起的低血容量休克,是傷員發(fā)生早期死亡和后期并發(fā)癥的主要原因之一,而血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷則是休克期血流動(dòng)力學(xué)紊亂和臟器功能損害的病理生理基礎(chǔ)。本文擬采用重度燒沖復(fù)合傷犬和犬臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞為模型,研究膽堿能N樣α7受體激動(dòng)劑對(duì)犬燒沖復(fù)合傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制,為臨床燒沖復(fù)合傷早期抗休克治療提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法一:1.選取Beagle犬,采用黑索金爆炸致沖擊傷,而后用凝固汽油燃燒造成35％TBS

2、AⅢ°燒傷,建立中度沖擊傷+重度燒傷的犬重度燒沖復(fù)合傷模型。2.將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)化分為:假傷對(duì)照組;燒傷組;沖擊傷組;燒沖復(fù)合傷組;燒沖復(fù)合傷不復(fù)蘇組和燒沖復(fù)合傷PNU282987組。測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、血?dú)?、血炎癥介質(zhì)和粘附因子的水平、肝腎功能以及24小時(shí)尿量;計(jì)算氧輸量和氧耗量;測(cè)定血漿容量及血管通透性的變化。傷后24h采用放血法處死犬,測(cè)定臟器含水量,取肺組織行病理診斷和微血管內(nèi)皮細(xì)胞連接蛋白免疫組化。
　　方法二:1.取新生

3、犬臍帶,采用膠原酶分別消化不同時(shí)間,提取臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞。采用臺(tái)盼藍(lán)染色進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。而后經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng),取第3代細(xì)胞進(jìn)行鑒定,建立犬臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取、培養(yǎng)方法。2.酶消化法提取的犬臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,以第3代為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。給予燒沖復(fù)合傷血清刺激,分別給予煙堿和蛋白激酶C、Rho激酶的阻斷劑和激動(dòng)劑干預(yù),測(cè)定其單層血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性;分析各組血管內(nèi)皮細(xì)胞連接蛋白以及上游調(diào)控因子的表達(dá)。
　　結(jié)果一:1.5g黑索金爆炸,通過大體

4、解剖及肺臟組織病理HE染色證實(shí):距離爆炸源50cm的比格犬可被爆炸致中度沖擊傷,結(jié)合凝固汽油燃燒致35%TBSA重度燒傷,結(jié)合上述兩步致傷可建立犬重度燒沖復(fù)合傷模型。2.燒沖復(fù)合傷后血管內(nèi)皮細(xì)胞嚴(yán)重受損,屏障功能失衡,血管通透性增高,組織水腫,血容量驟減,循環(huán)系統(tǒng)呈低排高阻,臟器缺血缺氧更為嚴(yán)重;膽堿能α7受體激動(dòng)劑可以顯著減低血管通透性和組織水腫,提高血容量,改善血流動(dòng)力學(xué)和肺通氣換氣,糾正臟器的缺血缺氧狀態(tài)。
　　結(jié)果二:1.

5、1%Ⅰ型膠原酶消化7min可從全臍靜脈提取大量多角形細(xì)胞,免疫熒光染色和流式細(xì)胞儀均可以鑒定該細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞。2.燒沖復(fù)合傷犬血清刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞后,細(xì)胞連接蛋白的表達(dá)顯著下降,其上游的調(diào)節(jié)蛋白(蛋白激酶C和ROCK1)的表達(dá)則顯著升高,單層細(xì)胞通透性顯著提高;而加入煙堿或膽堿能受體激動(dòng)劑均可以抑制其過高的通透性,降低蛋白激酶C和ROCK1,提高連接蛋白的表達(dá);但給予受體阻斷劑或提高蛋白激酶C和Rho激酶的活性后則可以抑制該的效果。