模擬水樣f2噬菌體濃縮方法的研究.pdf

1、目的：1實驗室自行設計制備反沖超濾裝置,探索最優(yōu)化的實驗條件以達到較好濃縮水中大腸桿菌f2噬菌體的效果。2.探索聚乙二醇-氯化鈉(PEG-NaCl)法濃縮f2噬菌體的效果及不同聚乙二醇(PEG)濃度對f2噬菌體回收率的影響。
　　方法：1通過預實驗,探索超濾儀器的實際壓力適用范圍,不同壓力下出水率,確定實驗用的壓力范圍。設計三因素三水平的正交實驗,調節(jié)超濾儀器壓力、水樣溫度及pH三個因素,利用切割分子量為10萬dalton,內徑為

2、10nm的改性聚氯乙烯(PVC)中空超濾膜富集模擬水樣中的大腸桿菌 f2噬菌體,采用雙層瓊脂平板法測定其回收率。2.將f2噬菌體加入到3％牛肉浸膏溶液中模擬經(jīng)初次濃縮后的水樣,使用PEG-NaCl法對水樣進行濃縮,采用雙層瓊脂平板法測定水樣中f2噬菌體含量,比較不同濃度PEG8000對于f2噬菌體的回收率的影響。
　　結果：1經(jīng)過正交實驗探索優(yōu)化條件,在壓力0.3MP,溫度為4℃, pH7.0的條件下,單次不循環(huán)f2噬菌體的回收率

3、可達94.6％;10L模擬水樣循環(huán)濃縮,在壓力0.3MP, pH7.0,溫度25℃條件下總回收率可達86.3％以上。2.PEG-NaCl法(130g/L PEG8000)的f2噬菌體回收率可達65.3％以上,當PEG8000濃度為40g/L和60g/L時,回收率僅有0.16％和2.64％;而當PEG的濃度在80g/L～200g/L范圍內時,各濃度組的平均回收率在70％～90％之間波動;經(jīng)統(tǒng)計學檢驗,80g/L～200g/L各組回收率之間

4、無顯著性差異,40g/L和60g/L的兩組回收率與其他各組間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。
　　結論：1在可控的壓力下,反沖超濾膜過濾裝置適用于自然條件的水環(huán)境pH、溫度,是一種簡便可行的水體環(huán)境病毒富集裝置,加入反沖過程,可有效提高病毒總回收率。2 PEG-NaCl法是一種較為理想的二次濃縮方法,當加入 PEG8000的濃度在80g/L～200g/L時,f2噬菌體的回收率可達70％以上,且在該范圍內濃度變化對回收率的影響