基于自體血漿蛋白支架的組織工程皮膚樣復合物的構(gòu)建、應用與評價.pdf

1、皮膚缺損的修復，尤其是慢性創(chuàng)面，難愈性潰瘍創(chuàng)面，全層大面積缺損的治療，一直是整形外科和燒傷外科經(jīng)常遇到的難題，臨床上多采用各種自體皮片、異體皮膚或皮瓣移植修復，其不僅造成供區(qū)新的創(chuàng)傷，有時還存在著供皮來源限制，供區(qū)繼發(fā)性損傷大，異體皮膚移植引起免疫排斥反應等眾多問題。隨著組織工程技術研究的深入，應用組織工程皮膚修復皮膚缺損是目前皮膚缺損修復研究的熱點之一，各國專家學者都研究了許多種構(gòu)建組織工程皮膚的方法，為臨床解決皮膚缺損的修復提供了新

2、的思路。盡管目前已有的組織工程化皮膚，已具有與正常皮膚類似的結(jié)構(gòu)及屏障功能，應用于臨床取得了一定療效，但是很多組織工程皮膚產(chǎn)品仍不成熟，距理想的組織工程皮膚尚有不少差距，存在自體種子細胞來源缺乏、異體種子細胞誘發(fā)免疫排斥反應、體外培養(yǎng)時間長、缺乏血管、治療費用貴等缺點。因此，有必要去探索構(gòu)建一種新型的具有良好應用前景的組織工程皮膚。 目的：研制一種新型的組織工程支架——自體血漿纖維蛋白，將取自自體皮膚培養(yǎng)的成纖維細胞及表皮細胞分

3、別接種自體血漿制成的支架上，構(gòu)建一種組織工程皮膚樣復合物。并將該組織工程支架移植于動物筋膜層，觀察支架與組織的融合及毛細血管的生長情況，探討該組織工程皮膚樣復合物修復全層皮膚缺損的可行性。 方法：1．采集大鼠自體的血漿與纖維蛋白原融合后制成固態(tài)的血漿纖維蛋白支架，行形態(tài)學觀察及物理學及生物學評價。2．取大鼠自體皮膚，通過酶消化法分離表皮與真皮層，原代培養(yǎng)表皮細胞及成纖維細胞，用免疫熒光技術進行CK及波形絲蛋白的鑒定及形態(tài)學觀察。

4、3．將第3-5代的成纖維細胞及表皮細胞接種于血漿纖維蛋白支架上，構(gòu)建組織工程皮膚樣復合物，行HE及電鏡觀察。ELISA法測定成纖維細胞培養(yǎng)液中TGF—B1、bFGF含量。4．將血漿蛋白支架移植到大鼠皮下筋膜層，觀察蛋白支架內(nèi)毛細血管生長情況，分別取第3，5，7，14，21，28天的全層皮膚行組織學、免疫組織化學觀察。 結(jié)果：1．制備的血漿纖維蛋白膠呈清亮暗紅色，表面有光澤，可輕松從圓玻片上剝下來，用鑷子鑷起，形狀規(guī)則，圓形，直徑

5、約1.3cm。HE呈嗜伊紅染色，染色均勻，電鏡可以觀察到顯著的網(wǎng)狀多孔結(jié)構(gòu)。支架的降解速度適宜種子細胞的生長完全，且微生物學檢測陰性。2．角質(zhì)形成細胞及成纖維細胞體外培養(yǎng)良好，均貼壁生長。CK及波形絲蛋白免疫熒光染色，表現(xiàn)為陽性反應。3．角質(zhì)形成細胞及成纖維細胞在血漿纖維蛋白支架上生長良好，光鏡下可見細胞間連接緊密，HE染色顯示細胞鋪滿支架表面，電鏡顯示細胞已長入支架內(nèi)部。4．血漿蛋白支架植入大鼠皮下筋膜層后，創(chuàng)面愈合良好，未見排斥反應

6、，HE染色見少許炎癥細胞浸潤，移植5天后可見新生內(nèi)皮細胞芽，7天后可見毛細血管管狀結(jié)構(gòu)，加入VEGF的支架血管內(nèi)皮細胞的生長速度明顯快于不加VEGF的支架。 結(jié)論：利用自體血漿制備的纖維蛋白支架無毒性，來源方便，制備簡單，費用低廉，可以作為一種新型的組織工程支架。自體的角質(zhì)形成細胞及成纖維細胞接種在此支架上生長良好，能很快鋪滿全層，說明為種子細胞的生長提供了有利的基質(zhì)。血漿纖維蛋白膠植入大鼠筋膜層，可見膠中有新生血管樣結(jié)構(gòu)長出證