蛋白質(zhì)-多糖復(fù)合納米纖維膜用于構(gòu)建組織工程全層皮膚的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分蛋白質(zhì)/多糖和蛋白質(zhì)—多糖/P(LLA—CL)復(fù)合納米纖維膜用于皮膚缺損修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法評(píng)價(jià)絲素蛋白/殼聚糖(兩者比例為80：20)、絲素蛋白/殼聚糖(兩者比例為50：50)、絲素蛋白—?dú)ぞ厶?P(LLA—CL)(兩者比例為25：75)、膠原蛋白/殼聚糖(兩者比例為80：20)、明膠/透明質(zhì)酸(兩者比例為90：10)復(fù)合納米纖維膜對(duì)于SD大鼠背部全層皮膚缺損創(chuàng)面修復(fù)的作用。
　　 方

2、法：將上述五種復(fù)合納米纖維膜材料分成五組，并將其分成兩部分完成，第一部分一、二、三組，第二部分四、五、六組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組用相應(yīng)的復(fù)合納米纖維膜覆蓋在雌性SD大鼠皮膚缺損創(chuàng)面，外被油紗和紗布敷料；每組各用大鼠15只；對(duì)照組僅覆蓋油紗和紗布敷料，用大鼠15只。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠背部皮膚缺損的面積均為2×1．5cm2；第一部分于術(shù)后第3、7、21天，第二部分于術(shù)后第3、7、14天，每組各隨機(jī)取5只SD大鼠處死，觀察SD大鼠大體情況、創(chuàng)面情況

3、，并取創(chuàng)緣與正常創(chuàng)面組織4％甲醛固定，行石蠟包埋切片H—E染色光鏡下對(duì)比觀察。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面修復(fù)情況較對(duì)照組好，其中尤以絲素蛋白/殼聚糖(80：20)、絲素蛋白—?dú)ぞ厶?P(LLA—CL)(25：75)和膠原蛋白．殼聚糖(80：20)復(fù)合生物材料的促創(chuàng)傷修復(fù)作用更明顯。
　　 結(jié)論：絲素蛋白/殼聚糖(80：20)、絲素蛋白—?dú)ぞ厶?P(LLA—CL)(25：75)和膠原蛋白—?dú)ぞ厶?80：20)復(fù)

4、合納米纖維膜較普通生物敷料和其他兩組生物材料能更好的促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)、愈合，有著較好的科研和臨床應(yīng)用前景。
　　 第二部分蛋白質(zhì)—多糖復(fù)合納米纖維膜用于構(gòu)建組織工程全層皮膚的實(shí)驗(yàn)研究
　　 基于生物可降解復(fù)合納米纖維材料而設(shè)計(jì)的共培養(yǎng)體系制作的組織工程皮膚已有報(bào)道。在體外，對(duì)細(xì)胞與膠原蛋白—?dú)ぞ厶菑?fù)合納米纖維材料共培養(yǎng)后，并對(duì)納米生物材料進(jìn)行觀察和性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)也已有報(bào)道。我們現(xiàn)用這種共培養(yǎng)體系將SD大鼠皮膚角質(zhì)細(xì)胞和皮膚成

5、纖維細(xì)胞與膠原蛋白—?dú)ぞ厶?80：20)復(fù)合納米纖維材料共培養(yǎng)模擬全層皮膚結(jié)構(gòu)建立多層組織工程復(fù)合物。首先，分離培養(yǎng)SD大鼠皮膚角質(zhì)細(xì)胞和皮膚成纖維細(xì)胞，并在倒置顯微鏡下對(duì)細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行觀察；其次，將培養(yǎng)至三至四代的SD大鼠皮膚細(xì)胞與復(fù)合生物材料共培養(yǎng)；培養(yǎng)一周后，通過(guò)掃描電鏡觀察生物材料以及細(xì)胞在材料上面的形態(tài)；通過(guò)MTT試驗(yàn)評(píng)估細(xì)胞增殖與細(xì)胞在生物材料上面的增殖特性；用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法評(píng)估細(xì)胞以及細(xì)胞在生物材料上的生長(zhǎng)和形態(tài)。以合