肺癌95D與95C細(xì)胞株中轉(zhuǎn)移相關(guān)miRNAs的篩選研究.pdf

1、背景：肺癌是目前全球最常見(jiàn)、疾病負(fù)擔(dān)最重的惡性腫瘤。影響肺癌患者治療效果和預(yù)后的關(guān)鍵因素是肺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素，多階段，連續(xù)的生物過(guò)程。它的發(fā)生經(jīng)過(guò)一系列步驟：從原位侵襲開(kāi)始，接著腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血管或淋巴管，在循環(huán)中存活，出血管或淋巴管，在遠(yuǎn)處開(kāi)始并維持微小轉(zhuǎn)移灶，最后經(jīng)過(guò)血管化作用并增殖形成轉(zhuǎn)移腫瘤。目前研究認(rèn)為細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞粘附分子、水解蛋白酶、血管形成的相關(guān)分子、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因及miRNAs等均與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這些

2、細(xì)胞因子及基因相互影響和制約，影響腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的進(jìn)程。微小RNA(microRNA，簡(jiǎn)稱(chēng)miRNA)是一類(lèi)長(zhǎng)度約19-24核苷酸的單鏈非編碼RNA。目前研究表明miRNAs廣泛參與生物的生理和病理學(xué)過(guò)程，在細(xì)胞分化、增殖、凋亡、新陳代謝、感染，尤其是腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等生物學(xué)過(guò)程都發(fā)揮了重要作用。而轉(zhuǎn)移作為腫瘤的重要生物學(xué)特征，其與miRNAs的研究也引起了科學(xué)家們的廣泛關(guān)注。研究報(bào)道m(xù)iRNAs在乳腺癌，肝癌，胃癌，甲狀腺癌等腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)

3、程發(fā)揮了重要作用，但是miRNAs與肺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)研究還比較少。本研究擬使用miRNA芯片對(duì)不同轉(zhuǎn)移能力肺癌細(xì)胞株進(jìn)行篩選，以找到與肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的miRNAs，為進(jìn)一步研究miRNAs在肺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制等研究奠定基礎(chǔ)。
　　 目的：采用microRNA芯片篩選出肺癌高轉(zhuǎn)移能力95d細(xì)胞和低轉(zhuǎn)移能力細(xì)胞95c細(xì)胞差異表達(dá)的miRNAs。
　　 方法：常規(guī)培養(yǎng)肺癌95d及95c細(xì)胞株，取等量95d及95c細(xì)胞，用Trizol法分

4、別提取兩種細(xì)胞的總RNA；用PEG方法分離miRNA，使用T4 RNA連接酶標(biāo)記方法標(biāo)記CU-cy3，然后進(jìn)行miRNA芯片雜交與清洗，芯片掃描，采用LuxScan3.0圖像分析軟件對(duì)芯片圖像進(jìn)行分析，把圖像信號(hào)轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào)；再根據(jù)各張芯片的global mean進(jìn)行片間校正，最后用Significance Analysis of Microarrays(SAM，version2.1)挑選差異表達(dá)基因。
　　 結(jié)果：miRNA

5、芯片結(jié)果顯示，95D細(xì)胞相對(duì)于95C細(xì)胞上調(diào)的miRNA有22個(gè)：hsa-miR-138-2*,hsa-miR-487a,hsa-miR-151-5p,hsa-miR-125a-3p,hsa-miR-220b,hsa-miR-1229,hsa-miR-125a-5p,hsa-miR-1290,hsa-miR-18a, mmu-miR-1195,hsa-miR-487b,hsa-miR-652,hsa-miR-1285,mmu-miR-7

6、00,hsa-miR-663，hsa-let-7g，hsa-miR-222，預(yù)測(cè)的miRNA有MIR232，MIR196，MIR237，MIR189，MIR191；表達(dá)下調(diào)的有：mmu-miR-220,hsa-miR-5481。
　　 結(jié)論：⑴miRNA在肺癌高轉(zhuǎn)移能力95d細(xì)胞株和低轉(zhuǎn)移能力95c細(xì)胞株中存在差異表達(dá)miRNAs。⑵肺癌高轉(zhuǎn)移能力95d細(xì)胞株中表達(dá)上調(diào)的22條miRNAs可能促進(jìn)肺癌轉(zhuǎn)移，表達(dá)下調(diào)的2條miRN