不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦WNT6基因突變位點(diǎn)篩查及KIR2DL4基因多態(tài)性研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 WNT6基因在不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦基因突變位點(diǎn)的篩查
　　研究目的:通過(guò)對(duì)中國(guó)漢族100對(duì)不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦WNT6基因突變位點(diǎn)的篩查，探討不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是否與WNT6基因突變相關(guān)。
　　研究方法:利用PCR擴(kuò)增及Sanger法基因測(cè)序技術(shù)，對(duì)中國(guó)漢族100對(duì)不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦和中國(guó)漢族100對(duì)正常生育夫婦行WNT6基因4個(gè)外顯子的基因序列及相關(guān)側(cè)翼序列檢測(cè)

2、。與Ensembl提供的正常序列比對(duì)，分析WNT6基因編碼序列是否存在異常堿基改變、插入或缺失。若發(fā)現(xiàn)新的突變位點(diǎn)，則擴(kuò)大對(duì)照組樣本量，進(jìn)一步驗(yàn)證突變位點(diǎn)是否只存在于病例組。后續(xù)應(yīng)用多個(gè)在線軟件預(yù)測(cè)突變位點(diǎn)對(duì)基因功能的影響。
　　研究結(jié)果:測(cè)序結(jié)果顯示病例組4名女性患者WNT6基因各自篩查出4個(gè)新發(fā)突變位點(diǎn):1個(gè)位于內(nèi)含子1與外顯子1交界序列，屬無(wú)義突變;2個(gè)位于外顯子3編碼序列，一個(gè)錯(cuò)義突變，一個(gè)同義突變;1個(gè)位于3'UTR區(qū)域

3、，突變意義不詳。病例組男性患者及對(duì)照組夫婦雙方均未發(fā)現(xiàn)相同突變位點(diǎn)。位于該基因外顯子3的錯(cuò)義突變?yōu)閏.443T＞G，該突變位于WNT1功能域，突變導(dǎo)致編碼氨基酸改變，且兩種氨基酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)均不同，進(jìn)一步的蛋白質(zhì)模型預(yù)測(cè)表明其蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)受到影響。擴(kuò)大對(duì)照組女方樣本量1倍，仍未發(fā)現(xiàn)相同的新發(fā)錯(cuò)義突變位點(diǎn)。所有樣本均未檢測(cè)到已知的SNPs位點(diǎn)。
　　結(jié)論:不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)女性患者WNT6基因錯(cuò)義突變可能是導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的原因之

4、一，為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的病因?qū)W研究補(bǔ)充新內(nèi)容，在國(guó)際上未見(jiàn)相同報(bào)道，仍需要進(jìn)一步的功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
　　第二部分 KIR2DL4基因多態(tài)性與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性研究
　　研究目的:本研究對(duì)96對(duì)中國(guó)漢族不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者夫婦進(jìn)行KIR2DL4基因多態(tài)性分析，探討KIR2DL4基因多態(tài)性與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)性。
　　研究方法:以96對(duì)不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦和94對(duì)正常生育夫婦為研究對(duì)象，對(duì)KIR2DL4基因外顯子3

5、、外顯子5、外顯子7、外顯子8和外顯子9基因序列行PCR-SBT擴(kuò)增測(cè)序，即采用兩對(duì)引物，外顯子3和5用一對(duì)引物，外顯子7、8和9用一對(duì)引物，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)兩步純化后，用四對(duì)引物分別從上、下游測(cè)序，測(cè)序方法采用直接基因測(cè)序技術(shù)。分析基因在總?cè)巳褐械任换蝾l率的發(fā)生率，以及外顯子7的9A/10A多態(tài)位點(diǎn)等位基因頻率在病例組和對(duì)照組的差異。
　　研究結(jié)果:測(cè)序結(jié)果分析顯示該研究中國(guó)漢族人群的基因型分布符合文獻(xiàn)報(bào)道的中國(guó)人群的基因型分布。而

6、位于跨膜區(qū)域第7外顯子10A/9A多態(tài)位點(diǎn):基因型頻率比較發(fā)現(xiàn)，本研究人群中總的基因型頻率的比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;夫婦一方或夫婦雙方的基因型頻率在兩組之間均無(wú)明顯差異。等位基因型頻率比較發(fā)現(xiàn)，該多態(tài)位點(diǎn)等位基因型頻率在本研究人群中與中國(guó)漢族人群報(bào)道的等位基因型頻率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;兩組中男方或夫婦雙方的等位基因基因型頻率無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。女方9A等位基因型頻率(19.3％)高于對(duì)照組(14.9％)，9A單倍體型在病例組有增高的趨勢(shì)，但經(jīng)過(guò)統(tǒng)