LncRNA AFAP1-AS1在大腸癌中的表 達(dá)及臨床意義.pdf

1、背景：
　　大腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，隨著生活條件的改善、生活方式及飲食習(xí)慣的改變,在我國(guó)大腸癌發(fā)病率逐漸增高。大腸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多因素、多步驟過(guò)程,與不良生活方式、環(huán)境因素、遺傳易感因素及疾病史等密切相關(guān)。近年的研究表明，長(zhǎng)片段非編碼核糖核酸（lncRNA）在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要的調(diào)控功能，其在大腸癌中起著類似癌基因或抑癌基因的作用?；蛐酒夹g(shù)能夠篩選大腸癌組織中表達(dá)差異的lncRNA，為大腸癌的

2、基礎(chǔ)和臨床研究帶來(lái)新的手段。
　　目的：
　　1.通過(guò)基因芯片技術(shù)篩選大腸癌組織及癌旁正常組織中表達(dá)差異的lncRNA。
　　2.探討lncRNA AFAP1-AS1在大腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)水平及其與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系。
　　3.分析AFAP1-AS1在大腸癌細(xì)胞株和大腸正常上皮細(xì)胞株中的表達(dá)狀況。
　　4.探討AFAP1-AS1的表達(dá)水平對(duì)大腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　材料與方法

3、
　　材料：
　　基因芯片篩選lncRNA的大腸癌標(biāo)本（5例）,AFAP1-AS1臨床驗(yàn)證大腸癌標(biāo)本（70例）均來(lái)源于2014年10月至2015年1月廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文
　　院胃腸外科標(biāo)本庫(kù)。大腸癌細(xì)胞株（HT26、HCT116、SW480、SW620）和大腸正常上皮細(xì)胞株（NCM460）獲贈(zèng)于廣州醫(yī)科大學(xué)化學(xué)致癌研究所。
　　方法：
　　1.采用基因芯片篩選并分析大腸癌組織與癌

4、旁正常組織中差異表達(dá)的lncRNA。
　　2.運(yùn)用定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）方法，檢測(cè)AFAP1-AS1在70例大腸癌組織和相應(yīng)癌旁正常組織中的表達(dá)水平，并分析其表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系。
　　3.運(yùn)用qRT-PCR方法，分析AFAP1-AS1在大腸癌細(xì)胞株（HT26、HCT116、SW480、SW620）及大腸正常上皮細(xì)胞株（NCM460）中的表達(dá)水平。
　　4.采用siRNA轉(zhuǎn)染AFAP1-AS

5、1高表達(dá)的大腸癌細(xì)胞（HCT116、SW620），下調(diào)其AFAP1-AS1的表達(dá)水平；分別用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)，檢測(cè)AFAP1-AS1表達(dá)下調(diào)對(duì)大腸癌細(xì)胞體外增殖和凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　1.基因芯片檢測(cè)結(jié)果，5例大腸癌組織中表達(dá)差異的lncRNA共5751個(gè)(P<0.05，大腸癌組織較癌旁正常組織表達(dá)量2倍或2倍以上)，其中表達(dá)上調(diào)的lncRNA2310個(gè)，表達(dá)下調(diào)的lncRNA3441個(gè)。大腸癌組織中AFAP

6、1-AS1的表達(dá)水平高于癌旁正常組織10.36倍（P<0.05）。
　　2.70例大腸癌患者癌組織中AFAP1-AS1的相對(duì)表達(dá)量（2-ΔCt）為0.166±0.092，癌旁正常組織的相對(duì)表達(dá)量（2-ΔCt）為0.037±0.005，大腸癌組織中AFAP1-AS1的相對(duì)表達(dá)量高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　3. AFAP1-AS1的表達(dá)水平與大腸癌患者的腫瘤大小、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、pTNM分期（Ⅰ

7、/Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ）、CEA水平顯著相關(guān)（P<0.05），而與年齡、性別及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)顯著相關(guān)（P＞0.05）。
　　4.與大腸正常上皮細(xì)胞NCM460相比，AFAP1-AS1的表達(dá)水平在大腸癌細(xì)胞株HCT116、SW620、HT29和SW480中高表達(dá)，相對(duì)表達(dá)倍數(shù)（2-ΔΔCt）分別是7.263±0.965（P<0.01）、6.258±2.092（P<0.01）、5.088±1.487（P<0.01）和3.851±1.451（P<0.

8、05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.用siRNA-1和siRNA-2片段分別下調(diào)大腸癌細(xì)胞 HCT116和SW620中AFAP1-AS1的表達(dá)水平。在HCT116細(xì)胞中，與mock組（未轉(zhuǎn)染組）相比，siRNA-1轉(zhuǎn)染組、siRNA-2轉(zhuǎn)染組和siRNA-NC組（陰性對(duì)照組）中細(xì)胞的增殖率為40.238±6.131％、46.199±9.897%和99.258±2.267%。siRNA-1轉(zhuǎn)染組和siRNA-2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖率比m

9、ock組下調(diào)60%（P<0.01）和54%（P<0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。mock組和siRNA-NC組細(xì)胞增殖率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。在SW620細(xì)胞中，與mock組（未轉(zhuǎn)染組）相比，siRNA-1轉(zhuǎn)染組、siRNA-2轉(zhuǎn)染組和siRNA-NC組（陰性對(duì)照組）中細(xì)胞的增殖率為33.718±2.524%、35.688±3.990%和97.501±4.656%。siRNA-1轉(zhuǎn)染組和siRNA-2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖率比mock組

10、下調(diào)66%（P<0.01）和64%（P<0.01），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。mock組和siRNA-NC組細(xì)胞增殖率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。6.在HCT116細(xì)胞中，siRNA-1轉(zhuǎn)染組和siRNA-2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的平均凋亡率為13.883±1.410%和11.487±1.036%，mock組和siRNA-NC組細(xì)胞的平均凋亡率為6.757±1.325%和5.867±0.931%。siRNA-1轉(zhuǎn)染組和siRNA-2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的凋亡率比

11、mock組上調(diào)7.126%（P<0.05）和4.730%（P<0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。mock組和siRNA-NC組細(xì)胞凋亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.大腸癌組織中AFAP1-AS1表達(dá)水平高于癌旁正常組織。
　　2.AFAP1-AS1的表達(dá)水平與大腸癌的腫瘤大小、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、pTNM分期（Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ）、CEA水平顯著相關(guān)，而與年齡、性別及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)顯著相關(guān)。
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