LncRNA ZSWIM8-AS1在結(jié)直腸癌中的表達及臨床意義.pdf

1、背景：
　　結(jié)直腸癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在逐年增高，死亡病例數(shù)也逐年上升。影響結(jié)直腸癌的預(yù)后因素很多，其中最主要的是腫瘤分期，Dukes’A期根治術(shù)后五年生存率超過90％，但Dukes’C期的患者則僅有30%左右。故早期發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌是提高患者生存率的關(guān)鍵。近年的研究表明，長片段非編碼核糖核酸（LncRNA）在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要的調(diào)控功能，起著癌基因或抑癌基因的作用。某些LncRNA表達量在癌組織中

2、明顯升高或者降低，提示其與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展有一定聯(lián)系?；蛐酒夹g(shù)的快速發(fā)展為發(fā)現(xiàn)這些表達量異常的LncRNA提供了可能。故早期發(fā)現(xiàn)這些LncRNA，有望為結(jié)直腸癌的早期診斷、預(yù)測預(yù)后、個體化治療甚至基因治療提供新思路。
　　目的：
　　1.通過基因芯片技術(shù)檢測5對結(jié)直腸癌及癌旁正常組織中LncRNA表達譜，篩選出表達差異的LncRNA。
　　2.檢測LncRNAZSWIM8-AS1在結(jié)腸癌細胞株及結(jié)腸正常上皮細胞

3、株中的表達是否存在差異。
　　3.探討LncRNAZSWIM8-AS1在新鮮結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的表達水平及其與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。
　　4.檢測LncRNAZSWIM8-AS1在石蠟結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織中的表達水平，結(jié)合隨訪資料分析其與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系。
　　材料與方法
　　材料：
　　基因芯片篩選LncRNA的結(jié)直腸癌標(biāo)本（5對）,新鮮結(jié)直腸癌標(biāo)本（50例）。結(jié)直腸癌細胞

4、株（HT29、HCT116、SW480、LS174T）和正常大腸上皮細胞株（CCD841）。石蠟組織58例。
　　方法：
　　1.采用基因芯片技術(shù)從5對結(jié)直腸癌及癌旁正常組織中檢測出有顯著性差異的LncRNA。選取差異顯著的LncRNAZSWIM8-AS1；然后采用同一批標(biāo)本提取的RNA，運用定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）方法檢測其表達，采用配對T檢驗驗證qRT-PCR結(jié)果與基因芯片結(jié)果是否相符。
　　2.

5、運用qRT-PCR方法檢測LncRNAZSWIM8-AS1在結(jié)直腸癌細胞株（SW480、LS174T、HCT116和HT29）及正常大腸上皮細胞（CCD841）中的表達水平，并采用獨立樣本T檢驗分析其表達是否存在差異。
　　3.運用qRT-PCR，檢測在50例結(jié)直腸癌組織和相應(yīng)癌旁正常組織中的表達水平，采用配對T檢驗方法分析其表達水平與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。
　　4.運用qRT-PCR，檢測在58例石蠟結(jié)直腸癌組織

6、和相應(yīng)癌旁正常組織中的表達水平，采用配對T檢驗方法分析其表達水平與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系，并結(jié)合隨訪資料分析其與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.基因芯片檢測結(jié)果，5對結(jié)直腸癌組織中表達差異的LncRNA共5751個（P<0.05，并且結(jié)直腸癌組織為癌旁正常組織表達量2倍及2倍以上或0.5倍及0.5倍以下），其中腫瘤組織中表達上調(diào)的LncRNA2310個，表達下調(diào)的LncRNA3441個。選擇表達量高且差異在

7、2倍以上LncRNA篩選，結(jié)果LncRNAZSWIM8-AS1的表達水平是癌旁正常組織0.449050461倍（P<0.01）。
　　2.LncRNAZSWIM8-AS1在結(jié)直腸癌細胞株SW480、LS174T、HCT116和HT29中的相對表達倍數(shù)（2-ΔΔCt）是分別為0.465±0.016，0.422±0.040，1.179±0.168，0.949±0.076。LncRNAZSWIM8-AS1在SW480和LS174T細胞為

8、低表達，HCT116和HT29細胞較CCD841相差較小。獨立樣本T檢驗分析提示，與CCD841比較，LncRNAZSWIM8-AS1在SW480細胞中顯著低表達（P=0.004），LS174T顯著低表達（P=0.01）。但HCT116（P=0.181）和HT29（P=0.681）細胞無顯著性差異。
　　3.50例結(jié)直腸癌患者癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1的相對癌旁正常組織表達量為0.593±0.540。結(jié)直腸癌組織中L

9、ncRNAZSWIM8-AS1的相對表達量低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　4.LncRNAZSWIM8-AS1的表達水平與結(jié)直腸癌的腫瘤大小、淋巴結(jié)分期（N分期）、轉(zhuǎn)移分期（M分期）、pTNM分期（Ⅰ/ⅡvsⅢ/Ⅳ）顯著性負相關(guān)（allP<0.05），而與性別、年齡、組織學(xué)分級、腫瘤分期（T分期）無顯著性相關(guān)（allP≥0.05）。
　　5.58例石蠟結(jié)直腸癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1的

10、相對癌旁正常組織表達量為0.776±0.497。結(jié)直腸癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1的相對表達量低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　6.58例石蠟結(jié)直腸癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1的表達水平與結(jié)直腸癌的腫瘤大小、轉(zhuǎn)移分期（M分期）、pTNM分期（Ⅰ/ⅡvsⅢ/Ⅳ）顯著性負相關(guān)（allP<0.05），而與性別、年齡、組織學(xué)分級、腫瘤分期（T分期）、淋巴結(jié)分期（N分期）無顯著性相關(guān)（allP

11、≥0.05）。
　　7.LncRNAZSWIM8-AS1低表達的患者DFS較LncRNAZSWIM8-AS1高表達的患者DFS更短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.018）。HR（95%CI）1.88（1.10-3.20）
　　8.LncRNAZSWIM8-AS1低表達的患者OS較LncRNAZSWIM8-AS1高表達的患者OS更短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.037）。HR（95%CI）2.11（1.35-3.55）
　

12、　結(jié)論：
　　1.結(jié)直腸癌組織中LncRNAZSWIM8-AS1表達水平低于癌旁正常組織；
　　2.SW480及LS174T兩株結(jié)直腸癌細胞株中LncRNAZSWIM8-AS1的表達水平低于正常大腸上皮細胞；
　　3.LncRNAZSWIM8-AS1的表達水平與結(jié)直腸癌的腫瘤大小、淋巴結(jié)分期（N分期）、轉(zhuǎn)移分期（M分期）、pTNM分期（Ⅰ/ⅡvsⅢ/Ⅳ）顯著性負相關(guān)（allP<0.05），而與性別、年齡、組織學(xué)分級、腫

13、瘤分期（T分期）無顯著性相關(guān)（allP≥0.05）；提示LncRNAZSWIM8-AS1可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移有一定的相關(guān)性。
　　4.LncRNAZSWIM8-AS1在石蠟結(jié)直腸癌組織中表達水平與結(jié)直腸癌的腫瘤大小、轉(zhuǎn)移分期（M分期）、pTNM分期（Ⅰ/ⅡvsⅢ/Ⅳ）顯著性相關(guān)（allP<0.05），而與性別、年齡、組織學(xué)分級腫瘤分期（T分期）、淋巴結(jié)分期（N分期）無顯著性相關(guān)（P≥0.05）。
　　5.結(jié)直腸癌患者L