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1、~虢石鋤幣簽訴弓磅豢鋈~虢形筆翮擗協(xié)弓匆中文摘要DPC4在大腸癌中的表達(dá)規(guī)律及臨床意義摘要目的:探討大腸癌組織與外傷、良性病變需手術(shù)切除的大腸正常組織中DPC4的表達(dá)是否有差異,為大腸癌的臨床診治提供分子生物學(xué)依據(jù)。方法:自2010年9月至2012年12月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院大腸癌切除手術(shù)標(biāo)本及正常組織各60例,正常組織來源于因外傷行大腸部分切除的患者,分別取癌組織和正常組織做免疫組織化學(xué)檢查分析檢測DPC4蛋白表達(dá)情況。按照試劑說明書
2、首先進(jìn)行切片脫蠟水化,然后用3%過氧化氫溶液,在室溫下孵育10分鐘,再用微波爐加熱完成抗原修復(fù),采用正常山羊封閉血清之并在室溫下孵育15分鐘后甩去血清,先加入第一抗體并在4。C下孵育過夜,再加入第二抗體并在室溫下孵育30分鐘,最后采用新鮮配置的二氨基聯(lián)苯胺液顯色35分鐘,自來水沖洗,終止顯色反應(yīng):蘇木素復(fù)染胞核,中性樹膠封片,采用PBS緩沖液作為陰性對照。染色結(jié)果的判斷由兩名高年資病理科醫(yī)生進(jìn)行,采用Shimizu標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行在染色范圍和染
3、色強(qiáng)度兩個方面進(jìn)行判斷。染色范圍上無著色者計為為0分;小于1/3的細(xì)胞著色為局灶性著色,計為1分;大于1/3而小于2/3的細(xì)胞著色為多灶性著色,計為2分;大于2/3細(xì)胞著色為彌漫性著色,計為3分。染色強(qiáng)度上無著色為0分,清晰著色為2分,介于二者之間的為1分。最終將染色范圍和染色強(qiáng)度的得分相加,0分為染色陰性(一)、2分為弱陽性()、3分為陽性()、45分為強(qiáng)陽性(卅)并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。記錄60例患者的年齡、性別、細(xì)胞分化程度、腫瘤部位、
4、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度,其中年齡分為5厘米兩組;淋巴結(jié)分為有轉(zhuǎn)移和無轉(zhuǎn)移兩組;臨床分期按照Dukes分期方法將A期和B期分為一組,C期和D期分為一組;細(xì)胞分化中將高度分化和中度分化者分為一組,低度分化和無分化者分為一組;腫瘤部位中則分為結(jié)腸組和直腸組,記錄每一組的DPC4蛋白表達(dá)情況,以反應(yīng)其與眾多影響因素之間的關(guān)系。采用SPSSl30統(tǒng)計軟件,采用非參數(shù)Ridit檢驗對免疫組織化學(xué)的實驗結(jié)果進(jìn)行進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,對年齡、性別、細(xì)胞分化
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