原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者VCP表達與患者預(yù)后的相關(guān)性及機制的研究.pdf

1、目的:探討含纈酪肽蛋白(valosin-containing protein，VCP)表達水平與原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者預(yù)后的相關(guān)性，及VCP對人淋巴瘤細胞凋亡及增殖能力的影響。
　　方法:1.58例原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者眶內(nèi)淋巴瘤組織石蠟標本，采用免疫組化法檢測VCP表達水平，并對VCP表達水平與患者復(fù)發(fā)情況及生存率的相關(guān)性進行統(tǒng)計學(xué)分析，用X2檢驗及Fisher精確檢驗來分析VCP蛋白表達與各臨床因素之間的關(guān)系;Ka

2、plan-Meier法計算復(fù)發(fā)率、生存率，并繪制生存曲線;log-rank法計算組間差異，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;
　　2.根據(jù)免疫組化結(jié)果即VCP蛋白表達水平，選取10例患者眶內(nèi)腫瘤石蠟組織（5例×2組）抽提總RNA，并應(yīng)用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)定量比較2組VCP基因表達水平的差異;
　　3.免疫細胞化學(xué)染色法檢測人淋巴瘤細胞系Raji細胞及Daudi細胞VCP蛋白的表達。應(yīng)用特異、高效并操作方便的

3、RNAi技術(shù)，以VCP作為基因靶點，對Raji細胞建立有效的RNA干擾方法。利用脂質(zhì)體介導(dǎo)基因si-VCP轉(zhuǎn)染Raji細胞，RT-qPCR及Westernblot分別從mRNA水平及蛋白水平評估Raji細胞VCP基因沉默效果;
　　4.流式細胞術(shù)檢測VCP基因沉默的人淋巴瘤Raji細胞凋亡率的變化;
　　5.MTS法檢測VCP基因沉默對Raji細胞增殖能力的影響。
　　結(jié)果:1.58例眼眶MALT淋巴瘤患者中13例(2

4、2.4％)患者出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)時間為10-56個月，其平均值為39.5個月。8例患者(13.8％)死于腫瘤，4例患者(6.9％)死于與腫瘤無關(guān)的其他原因。5年無瘤生存率及總生存率分別是70.7％、79.3％。5年無瘤生存時間為10-60個月，其平均值為54.7個月;5年總生存時間為24-60個月，其平均值為57.2個月。
　　2.58例原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者眶內(nèi)腫瘤組織VCP表達陽性細胞百分率為32％到95％。VCP表達陽

5、性細胞百分率的中位值為45％，低于或等于45％為VCP表達level1，高于45％為VCP表達level2。58例原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者眶內(nèi)腫瘤組織VCP表達水平與患者復(fù)發(fā)(P=0.003)及腫瘤大小(P=0.008)密切相關(guān)。VCP表達水平與患者年齡、性別、LDH水平、紅細胞沉降率(ESR)、血清白蛋白水平、有無B癥狀等臨床特征無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。同時，VCP表達level1患者5年無瘤生存率及總生存率明顯高于leve

6、l2患者(P=0.001;P=0.032)。
　　3.10例患者眶內(nèi)腫瘤組織VCP mRNA表達水平與VCP蛋白表達水平一致，根據(jù)免疫組化結(jié)果level2組患者腫瘤組織VCP mRNA表達明顯高于level1組(P=0.009)。
　　4.人淋巴瘤細胞系Raji細胞及Daudi細胞VCP蛋白表達較強。利用脂質(zhì)體進行細胞轉(zhuǎn)染，VCP mRNA水平和蛋白表達水平分別被抑制65％和57％，基因沉默效果肯定。
　　5.流式細胞

7、術(shù)結(jié)果顯示，人淋巴瘤細胞系Raji細胞VCP基因沉默后，細胞凋亡明顯增強。
　　6.MTS結(jié)果顯示，人淋巴瘤細胞系Raji細胞VCP基因沉默后，細胞增殖能力明顯受到抑制。
　　結(jié)論:1.VCP是評價原發(fā)性眼眶MALT淋巴瘤患者預(yù)后的良好指標。
　　2.利用脂質(zhì)體介導(dǎo)si-VCP對人淋巴瘤Raji細胞靶基因VCP的抑制效果明顯，VCP mRNA表達水平明顯降低，從而使VCP蛋白表達量明顯下降。
　　3.VCP基因沉