緩衰口服液對(duì)缺血性腎病中“低氧-微血管荒廢-腎纖維化”病理鏈影響的研究.pdf

1、研究背景:以動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄(atherosclerotic renal artery stenosis，ARAS)為主的缺血性腎病，是引起終末期腎臟?。‥SRD）的重要病因。其進(jìn)展的主要機(jī)制是伴隨著動(dòng)脈粥樣硬化、內(nèi)皮損傷過(guò)程的微血管荒廢、低氧導(dǎo)致的小管-間質(zhì)纖維化。現(xiàn)行的藥物優(yōu)化治療(Optimal medicine treatment，OMT)并不能夠完全阻止患者ESRD的發(fā)生，而血管重建并沒(méi)有表現(xiàn)出對(duì)OMT的優(yōu)勢(shì)，因此探討

2、中醫(yī)藥治療ARAS有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。我們既往對(duì)其中醫(yī)病機(jī)、證候進(jìn)行了研究，并且臨床上選用益氣活血祛利濕的益腎緩衰方治療ARAS，初步的臨床試驗(yàn)表明該方能夠延緩ARAS患者腎功能的進(jìn)展。本研究就是基于與以往的臨床工作開(kāi)展中醫(yī)藥治療ARAS深層次的研究。
　　目的:本研究對(duì)益腎緩衰方治療ARAS機(jī)制進(jìn)行探討，通過(guò)緩衰口服液對(duì)ARAS小鼠的腎臟低氧誘導(dǎo)因子（Hypoxia-Inducible Factor，HIF-1α）和小管上皮細(xì)胞

3、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factor-β，TGF-β）等表達(dá)的影響，探討該方對(duì)ARAS的腎臟低氧-微血管荒廢-腎間質(zhì)纖維化病理過(guò)程的影響機(jī)制。
　　方法:采用國(guó)際廣泛使用的動(dòng)脈粥樣硬化模型—載脂蛋白E基因缺陷（ApoE-/-）小鼠行左側(cè)腎臟切除建立ARAS模型。將左側(cè)腎臟切除ApoE-/-小鼠分為緩衰口服液組、替米沙坦組、模型組，并設(shè)正常對(duì)照組（C57BL/6J野生型小鼠），術(shù)后2周開(kāi)始給藥，共給藥1

4、2周。對(duì)所有小鼠進(jìn)行眼球采血，進(jìn)行腎功能和血脂檢測(cè)，比較組間差異。運(yùn)用HE染色、Masson染色對(duì)左側(cè)腎臟切除ApoE-/-小鼠進(jìn)行腎動(dòng)脈組織學(xué)觀察，以及腎臟組織學(xué)觀察。應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)方法，評(píng)定益氣活血祛濕中藥（緩衰口服液）對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠腎皮質(zhì)組織中HIF-1α以及TGF-β表達(dá)的影響。運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法觀察各組小鼠腎臟α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)、Ⅷ因子相關(guān)抗原(Von Willebra

5、nd factor，vWF)和Ⅳ型膠原的表達(dá)。Western-blot觀察腎臟組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelialgrowth factor，VEGF)的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、緩衰口服液對(duì)腎功能和血脂的影響:(1)血清肌酐和尿素氮:模型組與正常對(duì)照組相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，即模型組小鼠的腎功能較正常小鼠明顯下降。替米沙坦組與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明即經(jīng)過(guò)替

6、米沙坦治療后，小鼠的腎功能明顯好轉(zhuǎn)，替米沙坦治療有效。緩衰口服液組與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明經(jīng)過(guò)緩衰口服液治療后，小鼠的腎功能明顯好轉(zhuǎn)，緩衰口服液治療有效。緩衰口服液組與替米沙坦組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)中，兩組在降低血清肌酐和尿素氮上無(wú)明顯差異。(2)甘油三酯和總膽固醇:模型組與正常對(duì)照組小鼠血清TG、CHO差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，模型組小鼠的血清TG、CHO較正常小鼠明顯升

7、高。緩衰口服液組與模型組小鼠血清TG、CHO差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明緩衰口服液治療能明顯降低小鼠的血清TG、CHO。替米沙坦組與模型組TG、CHO差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、緩衰口服液對(duì)腎動(dòng)脈和腎組織的影響:(1)腎動(dòng)脈:光鏡下觀察模型組的腎動(dòng)脈出現(xiàn)顯著的狹窄、內(nèi)皮下有大量的泡沫細(xì)胞、嚴(yán)重者出現(xiàn)纖維斑塊及纖維帽。緩衰口服液組的腎動(dòng)脈管腔狹窄程度明顯減輕。(2)腎組織:Masson染色:正常對(duì)照組腎間質(zhì)

8、無(wú)腎小管的萎縮及間質(zhì)的纖維化，無(wú)炎癥細(xì)胞的侵潤(rùn)。模型組腎間質(zhì)可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞灶狀分布，腎間質(zhì)纖維化較明顯。替米沙坦組腎間質(zhì)可見(jiàn)較多炎癥細(xì)胞灶狀分布，腎臟小管及間質(zhì)的損害程度不明顯。緩衰口服液組腎間質(zhì)可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞呈灶狀分布，腎臟損害程度不明顯。
　　3、RT-PCR檢測(cè)HIF-1α以及TGF-β表達(dá):與正常對(duì)照組相比，模型組HIF-1a和TGF-β的表達(dá)明顯增高(P＜0.05);緩衰口服液組與模型組比較，HIF-1a和TGF-β

9、的表達(dá)減少(P＜0.05)。免疫組化檢測(cè)Ⅳ型膠原、α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、vWF的表達(dá):緩衰口服液組與模型組比較，Ⅳ型膠原、α-SMA的表達(dá)減少，vWF表達(dá)增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Western-blot觀察腎臟組織VEGF的表達(dá):與正常對(duì)照組比較，模型組VEGF表達(dá)明顯減少(P＜0.05);模型組較緩衰口服液組，VEGF減少(P＜0.05);緩衰口服液組與替米沙坦組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論: