慢病毒介導的TNF-α SiRNA在C型Niemann-Pick病小鼠神經(jīng)變性中的作用研究.pdf

1、神經(jīng)系統(tǒng)的慢性炎癥在神經(jīng)變性疾病中起很關鍵的作用，與軸索變性和神經(jīng)元脫失密切相關，包括阿爾茨海默?。ˋD），帕金森?。≒D），肌萎縮側索硬化（ALS）和C型Niemann-Pick病（NPC）等神經(jīng)變性疾病。越來越多的證據(jù)表明，小膠質細胞激活并釋放過量的TNF-α參與并加速了神經(jīng)元變性的級聯(lián)反應，導致神經(jīng)元功能失調，突觸調節(jié)異常以及淀粉樣蛋白介導的記憶障礙。有多項研究證實，應用TNF-α抑制劑以及TNF-α-SiRNA降低其水平可以改善

2、臨床AD病人的認知功能以及改善AD模型小鼠的神經(jīng)病理損害。但是TNF-α是否為神經(jīng)變性疾病發(fā)病機理中的關鍵環(huán)節(jié)尚不清楚。Npc-1基因自然突變的npc小鼠模擬了人類NPC的病理生理變化，非常適合用來研究NPC以及其他的神經(jīng)變性疾病。我們前期研究發(fā)現(xiàn)npc小鼠腦部膠質細胞活化并分泌大量的TNF-α，但是TNF-α在npc小鼠病理變化以及病情進展過程中的作用尚不明確。因此，我們應用這種動物模型和TNF-α-SiRNA來觀察TNF-α對npc

3、小鼠病理學以及行為學的影響，進而探討TNF-α在神經(jīng)變性過程中扮演的角色。本實驗中，我們首先構建了攜帶TNF-α-SiRNA的慢病毒載體，感染體外培養(yǎng)細胞，通過RT-PCR以及ELISA檢測了其對TNF-αmRNA的沉默作用；同時對4周齡的npc小鼠進行該慢病毒側腦室注射，通過Real-time-PCR以及免疫組化檢測其沉默效率，并運用免疫組化、western-blot、體重測定、衣架懸掛實驗及足印實驗來評價npc小鼠病理及行為學變化。