中國漢族男性非梗阻性無精子癥易感基因的探索研究.pdf

1、第一部分中國漢族男性非梗阻性無精子癥ETV5,HORMAD1和HORMAD2基因相關(guān)性研究
　　目的:探討ETV5,HORMAD1和HORMAD2基因多態(tài)性與非梗阻性無精子癥的易感性。
　　方法:應(yīng)用Sequenom MassArray質(zhì)譜陣列技術(shù)對368例已生育的漢族男性人群(對照組)和361例漢族男性非梗阻性無精子癥(實驗組)ETV5基因的5個標簽單核苷酸多態(tài)(single nucleotide polymorphism

2、,SNP)位點（rs12631658,rs6444106,rs7430047,rs7433760,rs9824882),HORMAD1基因3個SNP位點(rs1336900,rs16840074,rs6694531),HORMAD2基因8個SNP位點（rs8135823,rs11090601,rs4823073,rs5763779,rs718772,rs9620953,rs9625930,rs975704)進行基因型檢測。應(yīng)用Plink

3、1.07軟件對數(shù)據(jù)資料進行統(tǒng)計分析,比較對照組與病例組最小等位基因頻率(MAF)及基因型差異,運用Haploview軟件對ETV5、HORMAD1和HORMAD2基因進行單體型分析。
　　結(jié)果:ETV5基因5個標簽SNP,HORMAD13個SNP和HORMAD28個標簽SNP的等位基因頻率、基因型分布在實驗組和對照組均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),進一步的單體型分析亦未顯示統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。當分析各SNP位點基因型在NO

4、A亞組分布情況,我們發(fā)現(xiàn)HORMAD2基因 rs718772位點最小等位基因頻率(MAF)分布在雙側(cè)平均睪丸體積大于10ml組與小于10ml組中有顯著性差異(P=0.035)。
　　結(jié)論:檢測的ETV5基因,HORMAD1和HORMAD2基因SNP位點多態(tài)性與漢族男性非梗阻性無精子癥的發(fā)生可能不相關(guān),HORMAD2基因 rs718772位點SNP可能與NOA患者的睪丸發(fā)育有關(guān)。
　　第二部分 CREM信號通路基因單核甘酸多態(tài)

5、性與NOA發(fā)生的關(guān)聯(lián)性研究
　　目的：比較CREM信號通路相關(guān)基因CREM、ACT、Kif17b和SPAG8基因17個SNPs(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位點的基因型頻率、等位基因頻率和單體型頻率等在特發(fā)性非梗阻性無精子癥(non-obstructive azoospermia,NOA)患者及正常生育男性間的分布,探討這4種基因突變是否為 NOA的致病因素。同時運用q-RT-PCR方

6、法,研究CREM在NOA(生精阻滯)患者睪丸組織及正常睪丸組織的表達差異,探討CREM基因在精子發(fā)生過程的作用及意義。
　　方法：我們選擇361例特發(fā)性非梗阻性無精子癥(NOA)作為實驗組,368例精液質(zhì)量正常的男性作為對照組。采用Sequenome Massarray質(zhì)譜陣列技術(shù)對CREM、ACT、Kif17b和SPAG8基因的17個SNPs位點進行了基因型分型。選取30例生精阻滯患者及30例正常精子發(fā)生的睪丸組織,運用q-RT

7、-PCR的方法檢測CREM基因的在兩組的mRNA表達水平,T檢驗進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計,P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：CREM基因共檢測4個 SNP位點(rs4934540,rs2295415,rs11592356,rs1148247),其中rs4934540位點C等位基因頻率(24.7％VS34.4%,P=4.9*10-5,OR=0.624,95%CI=(0.497-0.784),rs2295415位點的G等位基因頻率(18.

8、0% VS24.2%,P=0.003,OR=0.686,95%CI=(0.532-0.885),rs11592356位點G等位基因頻率(6.9%VS10%,P=0.036,OR=0.672,95%CI=(0.461-0.978)均在NOA組顯著低于正常生育組,提示該位點的變異可能對正常精子的發(fā)生具有保護作用,進一步的單體型分析提示TATG(rs493454,rs2295415,rs11592356 and rs1148247)單體型的比

9、例在NOA組顯著高于正常生育組(P=0.011,OR=1.317,95%CI=1.064-1.631)。而ACT基因9個標簽SNPs(rs2273621,rs9373985,rs2252816,rs9398152,rs9398148,rs4839688,rs17056756,rs3798292,rs9486705)、KIF17b3個SNP(rs631357,rs522496,rs2296225)、SPAG8基因1個SNP(rs37636

10、31)基因型分布在實驗組及對照組均未見差異。CREM基因在NOA(生精阻滯)組及正常精子發(fā)生中睪丸組織的表達用明顯差異,CREM基因在NOA(生精阻滯)患者睪丸組織中低表達(P=0.00001)。
　　結(jié)論：CREM基因多態(tài)性可能是中國精子發(fā)生障礙患者的遺傳易感因素,rs4934540,rs2295415,rs11592356三個位點對精子發(fā)生可能起保護作用,而ACT、KIF17b和SPAG8基因單核苷酸多態(tài)性與NOA的發(fā)生無關(guān)。