Wnt-β-catenin信號通路在糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的阿爾茨海默病樣病變中的作用機(jī)制研究.pdf

1、第一部分糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)了HEK293/tau細(xì)胞的阿爾茨海默病樣病變
　　目的：本部分研究旨在證實(shí)糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids,GC)能否在阿爾茨海默病樣細(xì)胞模型(HEK293/tau)中誘導(dǎo)阿爾茨海默病樣病變,并探討其可能信號調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：地塞米松(dexamethasone,DEX)分別處理轉(zhuǎn)染人tau441的人胚腎293細(xì)胞(HEK293/tau)和野生型的人胚腎293細(xì)胞(HEK293/wt),

2、采用CCK-8法檢測DEX對細(xì)胞活力的影響,Westernblot研究兩組細(xì)胞tau蛋白磷酸化(p-T205)和非磷酸化(Tau-1)及其上游激酶糖原合成激酶-3β(GSK-3β),ps9-GSK-3β水平的變化,并加用GSK-3β的抑制劑LiCl,觀察其對糖皮質(zhì)激素介導(dǎo)的tau蛋白過度磷酸化相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)作用。
　　結(jié)果：CCK-8細(xì)胞活力檢測結(jié)果顯示,較之HEK293/wt細(xì)胞,DEX處理48h引起了HEK293/tau組細(xì)胞活力

3、的下降(t=6.60,P<0.05);Westernblot結(jié)果顯示,與HEK293/wt組相比,DEX引起了HEK293/tau組細(xì)胞ps9-GSK3β水平的增加(t=7.01,p<0.05),p-T205和Tau-1蛋白表達(dá)量相應(yīng)增加和減少(t=5.51;t=3.86,p<0.05),而LiCl可以相應(yīng)逆轉(zhuǎn)上述改變。
　　結(jié)論：在人tau存在的前提下,GC增加了HEK293/tau細(xì)胞的毒性損傷作用,并通過上調(diào)GSK-3β的活

4、性,增加了tau蛋白過度磷酸化。
　　第二部分Wnt/β-catenin信號通路參與調(diào)節(jié)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的HEK293/tau細(xì)胞的凋亡
　　目的：探討Wnt/β-catenin信號通路在糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids,GC)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中的作用。
　　方法：地塞米松(dexamethasone,DEX)分別處理轉(zhuǎn)染人tau441的人胚腎293細(xì)胞(HEK293/tau)和野生型的人胚腎293細(xì)胞(HEK2

5、93/wt),采用Westernblots技術(shù)檢測兩組細(xì)胞糖原合成激酶-3β(GSK-3β),ps9-GSK-3β水平及其β-連環(huán)蛋白(β-catenin),p-β-catenin,bcl-2蛋白含量的變化,并加用GSK-3β的抑制劑LiCl,觀察其對相關(guān)蛋白相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)作用。
　　結(jié)果：Westernblots結(jié)果表明,較之HEK293/wt細(xì)胞,DEX引起了HEK293/tau組細(xì)胞ps9-GSK3β,β-catenin,bcl