COPD患者淋巴細(xì)胞GRA的表達(dá)及其與血清TNF-α、IFN-γ、IL-2相關(guān)性研究.pdf

1、目的：檢測(cè)顆粒溶素(Granulysin,GRA)在不同病期的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者及健康對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平，并同步測(cè)定血清中腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、γ-干擾素(Interferon-gama，IFN-γ)和白細(xì)胞介素-2(Interleukin-2,II-2)濃度。分別比較顆

2、粒溶素和TNF-α、IFN-γ、IL-2在不同病期的COPD患者及健康對(duì)照組中表達(dá)的差異性，及與上述三種細(xì)胞因子血清濃度的相關(guān)性。初步探討COPD患者不同病期顆粒溶素表達(dá)特點(diǎn)以及和TNF-α、IFN-γ、IL-2之間的關(guān)系，顆粒溶素在COPD患者疾病發(fā)展變化過(guò)程中可能起到的作用及其意義。 方法：病人來(lái)源于瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院患者(2006年3月-2006年6月)，健康對(duì)照組均來(lái)自門(mén)診健康體檢者。清晨空腹抽取COPD患者

3、急性發(fā)作期28例，臨床緩解期26例，健康對(duì)照組23例靜脈血10ml。取5ml肝素抗凝的靜脈血，分離的淋巴細(xì)胞，并制成細(xì)胞涂片，采用即用型鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶(streptavidin-peroxidase，SP)_9003三步法免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)操作，以新鮮配制的DAB-H2O2顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹(shù)膠封片。已知陽(yáng)性細(xì)胞涂片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。每個(gè)染色流程均設(shè)有對(duì)照以作為染色質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色

4、顆粒者判為Granulysin陽(yáng)性細(xì)胞。按每張涂片的陽(yáng)性細(xì)胞比例及著色深淺劃分為-、+、++、+++四級(jí)。基本不著色或著色細(xì)胞少于5％為陰性(-)；著色淺淡或著色細(xì)胞占5％-25％為弱陽(yáng)性(+)；著色適中或著色細(xì)胞占26％-50％為中度陽(yáng)性(++)；著色深或著色細(xì)胞大于50％為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法同步測(cè)定血清TNF-α、IFN-γ、IL-2濃度。在492nm處測(cè)OD值，TNF-α、IFN-γ、IL-2濃度

5、與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中TNF-α、IFN-γ、IL-2的濃度。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)圖表的繪制，采用X2檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)分析等統(tǒng)計(jì)方法對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行處理。P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： ①Granulysin在COPD患者及健康對(duì)照組的淋巴細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)都主要位于細(xì)胞漿，54例COPD患者淋巴細(xì)胞中，其陽(yáng)性表達(dá)51例，陰性表達(dá)3例，陽(yáng)性

6、表達(dá)率為94.44％(51/54)。其中，急性發(fā)作期的陽(yáng)性表達(dá)率為96.43％(27/28)，臨床緩解期的陽(yáng)性表達(dá)率為92.31％(24/26)。23例健康對(duì)照組淋巴細(xì)胞中，其陽(yáng)性表達(dá)4例，陰性表達(dá)19例，陽(yáng)性表達(dá)率為17.39％(4/23)。Granulysin在COPD患者和健康對(duì)照組淋巴細(xì)胞中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為94.44％、17.39％二者比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 ②Granulysin在健康對(duì)照組的淋巴細(xì)胞

7、中Granulysin呈低表達(dá)(4/23)，在COPD患者臨床緩解期多為中度陽(yáng)性(17/26)，急性發(fā)作期多為強(qiáng)陽(yáng)性(22/28)，其表達(dá)隨著病情的變化而消長(zhǎng)，三者比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 ③COPD患者急性發(fā)作期血清TNF-α濃度為31.96±4.02 pg/ml，IFN-γ,濃度為26.83±6.02pg/ml，IL-2濃度為12.26±5.07pg/ml較臨床緩解期和健康對(duì)照組顯著增高(P<0.01)。臨床緩

8、解期血清TNF-α濃度為23.49±4.28pg/ml，IFN-γ,濃度為16.22±4.36pg/ml，IL-2濃度為7.23±3.41pg/ml均低于急性發(fā)作期，但仍高于健康對(duì)照組14.95±4.71 pg/ml，9.68±3.66 pg/ml。3.92±3.49pg/ml(P<0.05)。 ④COPD患者急性發(fā)作期和臨床緩解期 anulysin表達(dá)與血清TNF-α、IFN-γ,、IL-2濃度變化都呈正相關(guān)性，并隨著病情變化

9、存在明顯消長(zhǎng)關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)分別為0.52和0.59、0.54和0.72、0.79和0.77均．P<0.05。 結(jié)論： ①Granulysin參與了COPD炎癥過(guò)程，起著清除病原體的積極作用。其表達(dá)強(qiáng)度的消長(zhǎng)與氣道或/和肺部病原體的負(fù)荷量有關(guān)。 ②TNF-α、IFN-γ、IL-2與Granulysin在消除病原體方面可能起著相互協(xié)同的作用，可能影響Granulysin的釋放。 Granulysin在COP