孕期酒精暴露誘導(dǎo)SMS2---小鼠海馬苔蘚細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、凋亡是真核細胞生物普遍存在的生命現(xiàn)象，在維持機體正常發(fā)育、保護細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面發(fā)揮重要作用。但是，一些不良刺激如酒精，可導(dǎo)致細胞過度凋亡，造成機體功能損害，而孕期酗酒則會造成胎兒發(fā)育不良、器官畸形、甚至造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)嚴重損害，海馬和小腦對酒精損害比較敏感，小腦受損會引起機體共濟失調(diào)，海馬細胞過度凋亡則引起記憶、認知等功能障礙。我們知道，酒精可通過多種途徑導(dǎo)致細胞凋亡，并且第二信使神經(jīng)酰胺可介導(dǎo)細胞凋亡過程，但是，神經(jīng)酰胺是否參與酒

2、精誘導(dǎo)的細胞凋亡，目前還不清楚。因此，我們利用SMS2基因敲除會導(dǎo)致神經(jīng)酰胺堆積的特點，建立孕期酒精暴露模型，在組織層面上，觀察神經(jīng)酰胺對酒精誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡的影響，分析神經(jīng)酰胺、酒精、神經(jīng)細胞凋亡之間的關(guān)系，為進一步認識酒精毒理學(xué)的機制、為神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防與治療提供理論依據(jù)。
　　 目的:探討神經(jīng)酰胺對孕期酒精暴露誘導(dǎo)小鼠神經(jīng)細胞凋亡的影響及機制。
　　 方法:建立C57BL/6J野生小鼠和神經(jīng)鞘磷脂合成酶2基因敲

3、除(sphingomyelin synthase 2 knockout，SMS2-/-)小鼠的孕期酒精暴露模型，用酶學(xué)法檢測P0仔鼠血清神經(jīng)鞘磷脂(sphingomyelin，SM)的含量，利用免疫熒光染色法觀察對照組與模型組，各年齡點仔鼠齒狀回苔蘚細胞凋亡的數(shù)量變化，免疫印跡技術(shù)檢測P7、P14仔鼠海馬組織Caspase8、Caspase3激活蛋白的相對表達量。
　　 結(jié)果:①WT和SHS2-/-仔鼠，酒精暴露后其血清SM水平

4、降低且具有劑量依賴性(P<0.05)；SMS2-/-鼠血清SM水平低于同組野生型(Wild-type，WT)仔鼠(P<0.01)。②酒精暴露后WT和SMS2-/-仔鼠，齒狀回苔蘚細胞凋亡的數(shù)量隨酒精劑量的增加而增多(P<0.05)，有劑量依賴性，并且細胞凋亡的數(shù)量隨年齡的增長而減少；與同年齡、相同處理因素的WT仔鼠相比，SMS2-/-鼠齒狀回苔蘚細胞凋亡的數(shù)量較多(P<0.05)。③孕期酒精暴露后，兩基因型仔鼠海馬組織Caspase8、

5、Caspase3激活蛋白的表達量隨酒精劑量的增加而增高(P<0.05)且具有劑量依賴性；與同年齡、相同處理因素的WT仔鼠相比，SMS2-/-仔鼠海馬組織中Caspase8、Caspase3激活蛋白的表達量較高(P<0.05)。
　　 結(jié)論:SMS2基因的缺失使血清SM水平降低，可引起神經(jīng)酰胺在體內(nèi)蓄積；作為第二信使的神經(jīng)酰胺參與孕期酒精暴露誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡的過程，且有促進凋亡作用；孕期酒精暴露主要通過死亡受體途徑誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡