水基磁流體聯(lián)合融合蛋白RGD-tTF雙靶向誘發(fā)腫瘤組織血管栓塞.pdf

1、利用靶向性血栓藥物實(shí)現(xiàn)對實(shí)體瘤血管的選擇性栓塞是一種新穎的抗腫瘤策略。該策略以截短的組織因子(truncatedTissueFactor，tTF；也稱前凝血因子)為效應(yīng)因子，結(jié)合腫瘤血管靶向載體實(shí)現(xiàn)選擇性誘發(fā)腫瘤組織血管栓塞，阻斷腫瘤營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的供給，引發(fā)腫瘤缺血性壞死，達(dá)到抗腫瘤作用。目前的研究多采用單載體結(jié)合單效應(yīng)因子的形式，存在著載體結(jié)合力不足(單價結(jié)合)、載體藥物負(fù)荷低、效應(yīng)因子在靶位富集速度慢和濃度不足等問題，其療效并不理

2、想。為克服上述問題和提高該策略的抗腫瘤效果，本文首次利用水基磁流體為基體制備新型的納米磁控血栓藥物，以獲得藥物載體的多價結(jié)合、高容量攜帶、雙靶向(載體生物靶向與水基磁流體的磁性物理靶向)治療等特性。 為驗(yàn)證該設(shè)想的可行性，我們以FeCl3·6H2O為鐵源，NaOH為堿，利用改良后的化學(xué)共沉淀法制備MnFe2O4粒子，在制備過程中加入乙酸和表面活性劑檸檬酸修飾MnFe2O4粒子，制得以PBS為載液的MnFe2O4水基磁流體；利用H

3、—600透射電鏡觀測其納米粒徑，以超導(dǎo)量子干涉磁強(qiáng)儀(SQUID)鑒定磁性，并以MTT和LDH比色法檢測其細(xì)胞毒性；將RGD—tTF融合蛋白與水基磁流體結(jié)合后，通過一系列體外實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)合后RGD—tTF的整體活性；并在小鼠腫瘤模型中檢測RGD—tTF水基磁流體(RGD—tTF—MnFe2O4)的靶向定位及腫瘤血管栓塞效果。結(jié)果表明，成功制備出的納米粒子呈橢圓或圓形，粒徑尺寸集中在10-25nm之間，呈超順磁性并具磁流變現(xiàn)象，且該水基磁流

4、體能穩(wěn)定保存；凝血實(shí)驗(yàn)和凝血因子X(FX)活化實(shí)驗(yàn)證實(shí)本室重組的RGD—tTF融合蛋白與磁流體結(jié)合后仍保留tTF部分活化FX，引發(fā)血液凝固的的活性：流式細(xì)胞儀檢測表明，與磁流體的結(jié)合對RGD—tTF在內(nèi)皮細(xì)胞表面結(jié)合率無明顯影響，并證實(shí)在磁場的作用下能實(shí)現(xiàn)水基磁流體對RGD—tTF的體外細(xì)胞定位作用。在小鼠肝癌H22模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)RGD—tTF—MnFe2O4和單純的RGD—tTF均能選擇性定位于腫瘤組織，并特異性誘發(fā)