辛伐他汀作用下小鼠成骨細胞骨重建相關基因的研究.pdf

1、目的： 探尋一種可靠的能有效抽提RNA用于基因芯片檢測的小鼠成骨細胞培養(yǎng)方法；篩選辛伐他汀(simvastatin)作用下小鼠成骨細胞的差異表達基因，就其中與骨重建相關的表達基因進行分析，探討辛伐他汀作用下小鼠成骨細胞骨重建作用的相關機制。為進一步研究骨改建相關細胞網(wǎng)絡因子提供實驗思路和依據(jù)。 方法： 1．取材培養(yǎng)： 取<24小時新生小鼠，運用酶消化加組織塊法取材培養(yǎng)成骨細胞，細胞鋪滿培養(yǎng)瓶底后用0.25

2、％胰蛋白酶及EDTA消化傳代。 2．細胞鑒定： (1)倒置相差顯微鏡觀察小鼠成骨細胞的生長情況和形態(tài)特征，作形態(tài)學鑒定； (2)堿性磷酸酶染色鑒定； (3)茜素紅法標記礦化結節(jié)； (4)四環(huán)素法標記礦化結節(jié)。 3．培養(yǎng)第2代小鼠成骨細胞，實驗組加入終濃度為 1.0umol/L 辛伐他汀的無血清DMEM培養(yǎng)液，對照組為不含辛伐他汀的無血清DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)3天。提取RNA，cy3 和 cy

3、5 標記實驗組和對照組探針，用 BiostarM-140s 基因芯片雜交，檢測雜交信號，分析差異表達基因。 結果： 1. 倒置相差顯微鏡觀察、堿性磷酸酶染色、茜素紅法標記礦化結節(jié)、四環(huán)素法標記礦化結節(jié)證實所培養(yǎng)的細胞為成骨細胞。 2．與骨重建相關的基因共有27個，明顯上調的基因有5個(Ratio>2.0)，明顯下調的基因有4個(Ratio<0.5)，功能分類主要涉及骨吸收，成骨細胞的分化，骨礦化，骨吸收的負調節(jié)等