中國主要食管癌高發(fā)區(qū)河南省食管鱗癌發(fā)生與HPV感染關(guān)系的相關(guān)性研究.pdf

1、人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一種沒有包膜的DNA病毒,含有約7900bp的雙鏈環(huán)狀基因組,主要感染人類皮膚以及粘膜上皮細胞,引起皮膚和粘膜的上皮細胞增殖,從而導(dǎo)致感染部位的良性甚至惡性腫瘤的發(fā)生.
　　HPV基因組包含3個功能區(qū):1)非編碼上游調(diào)節(jié)區(qū);2)早期ORF(E1-E7)區(qū);3)晚期ORF(L1和L2)區(qū).由E1-E7編碼的早期蛋白與HPV基因調(diào)控和細胞轉(zhuǎn)化有關(guān),其中,E6和E7編

2、碼形成2個與惡性病變發(fā)病機理相關(guān)的蛋白,能導(dǎo)致細胞從正常到惡性病變的轉(zhuǎn)化.
　　食管癌是最常見的十大惡性腫瘤之一,發(fā)病率在世界不同地理區(qū)域差異很大.1982年Syrjanen等提出了HPV與食管癌的發(fā)生有關(guān)的觀點,從那時起一些證據(jù)證實HPV感染是食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)的重要致病因素之一.
　　目的：對河南省安陽市、洛陽市和林州市三個地區(qū)的食管鱗癌石蠟標

3、本進行HPV檢測,檢測三個地區(qū)的HPV感染率并對其分型,了解河南省不同區(qū)域的食管癌組織中HPV的分布特點,利用統(tǒng)計學(xué)手段分析地區(qū)之間的差異,探討HPV感染與食管癌發(fā)生的相關(guān)性;在此基礎(chǔ)上構(gòu)建HPV18 E6基因的真核表達載體,為預(yù)防與治療食管癌奠定基礎(chǔ).
　　方法：對149例食管鱗癌石蠟標本進行核酸提取,用HPV L1區(qū)通用引物GP5+/6+進行PCR鑒定,并用HPV16E6和HPV18E6型特異性引物對樣品進行分型檢測;統(tǒng)計分析

4、食管鱗癌標本HPV感染結(jié)果的差異,分析不同地區(qū)HPV感染的情況;采用聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reactbn，PCR)方法,擴增出HPV18 E6片段,再用BamHI和EcoRI雙酶切后定向克隆到真核細胞表達載體pcDNA3.1中,用限制性內(nèi)切酶酶切分析鑒定重組質(zhì)粒;以Western-Blot法檢測E6基因的表達情況.
　　結(jié)果：對河南省安陽市、洛陽市和林州市三個地區(qū)149例食管鱗癌石蠟標本進行了DNA提取

5、分析,其陽性率分別為84％(42/50)、93.9％(41/49)、96％(48/50).三個地區(qū)HPV16型檢出率分別為14％、32％和12.3％;HPV18型檢出率分別為81.6％、8％和16％;HPV16型和HPV18型共感染的檢出率分別為4％、12.3％和8％.HPV18E6基因的cDNA已克隆到真核細胞表達載體pcDNA3.1質(zhì)粒中,經(jīng)Western-Blot法鑒定,可見轉(zhuǎn)染293T細胞中有較高量的E6蛋白表達.
　　結(jié)

6、論：河南省安陽市、洛陽市和林州市三個地區(qū)149例食管鱗癌石蠟標本中HPV感染的平均陽性率為91.3％,說明 HPV感染和食管癌發(fā)生有重要的關(guān)系;HPV16和HPV18的平均檢出率為46.3％和13.2％,說明HPV16型和HPV18型在河南省地區(qū)具有比較高的分布特點.統(tǒng)計學(xué)分析,HPV18型在三個地區(qū)間沒有明顯的地區(qū)差異(P＞0.05),而HPV16型則有比較明顯的地區(qū)差異(P＜0.05),林州市的檢出率明顯高于其他兩市.構(gòu)建了pcDN