氨基甾體小分子對(duì)K562和Meg-01慢粒白血病細(xì)胞系的作用.pdf

1、目的：觀察氨基甾體類化合物對(duì)人慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞系和MEG-01細(xì)胞系的抑制增殖和誘導(dǎo)分化作用，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。 方法：采用MTT實(shí)驗(yàn)來觀察氨基甾體類化合物對(duì)K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞的抑制增殖能力；采用Wright染色，細(xì)胞表面CD71、CD41表面標(biāo)記物的檢測(cè)來觀察氨基甾體類化合物對(duì)K562及MEG-01細(xì)胞系的誘導(dǎo)分化作用；為了進(jìn)一步了解氨基甾體類化合物對(duì)K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞作用的機(jī)制，采用

2、熒光分光光度計(jì)檢測(cè)K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度（[Ca2+]i）的變化，采用RT-PCR實(shí)驗(yàn)觀察K562及MEG-01細(xì)胞內(nèi)bcr/abl融合基因的變化。 結(jié)果： 氨基甾體類化合物對(duì)K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞增殖能力和分化能力的影響 1.增殖方面：MTT結(jié)果顯示，終濃度為10-5mol/L的5種氨基甾體類化合物作用于K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞第5d，5種氨基甾體類化合物對(duì)K562細(xì)胞及MEG

3、-01細(xì)胞的增殖均有不同程度的抑制作用，對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（GIR）分別為Z-30（62.18±4.72）％，Z-31（35.25±2.16）％，Z-32（42.86±7.32）％， Z-33（64.71±1.24）％，Z-34（73.951±8.82）％。對(duì)MEG-01細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率（GIR）分別為 Z-30（43.24±5.61）％，Z-31（45.65±3.24）％，Z-32（60.81±2.57）％，Z-33（66.22

4、±6.26）％，Z-34（72.97±7.28）％。 2.分化方面：終濃度為10-5 mol/L的5種氨基甾體（Z-30、31、32、33、34）作用于K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞第5d Wright染色，鏡下觀察發(fā)現(xiàn)K562細(xì)胞核漿比例減少，有核切跡，核染色質(zhì)濃集變粗，胞質(zhì)增多，淺染，核周胞質(zhì)出現(xiàn)淡染區(qū)；MEG-01細(xì)胞則表現(xiàn)為核漿比例變小，胞核呈不規(guī)則狀，核染色質(zhì)濃集變粗，胞質(zhì)增多，淺染，核周胞質(zhì)出現(xiàn)淡染區(qū)。流式細(xì)胞儀分析

5、顯示：終濃度為10-6mol/L的5種氨基甾體（Z-30、31、32、33、34）作用于K562細(xì)胞第5d，細(xì)胞膜上CD71表面標(biāo)記表達(dá)陽性率分別為91.63％、91.07％、85.16％、80.85％、75.51％；終濃度為10-6mol/L的5種氨基甾體（Z-30、31、32、33、34）作用于MEG-01細(xì)胞第5d，細(xì)胞膜上CD41表面標(biāo)記表達(dá)陽性率分別為74.7％、64.5％、64.58％、54.96％、59.65％。

6、3.5種氨基甾體對(duì)K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]的影響。 利用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：經(jīng)終濃度為10-6mol/L的5種氨基甾體（Z-30、31、32、33、34）處理K562細(xì)胞0.5h，處理MEG-01細(xì)胞1h后，細(xì)胞內(nèi)游離[Ca2+]的熒光強(qiáng)度有所下降。 4.氨基甾體對(duì)K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞bcr/abl融合基因的影響：終濃度為10-6mol/L的5種氨基甾體類化合物作用于K562細(xì)胞及MEG

7、-01細(xì)胞第5d，提取其RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄及擴(kuò)增，與對(duì)照組相比，bcr/abl融合基因表達(dá)產(chǎn)量降低。 結(jié)論： 1.5種氨基甾體類化合物均能有效地抑制K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞的增殖，并呈濃度依賴性，但兩種細(xì)胞對(duì)不同的氨基甾體類化合物有不同的敏感性。 2.所有的氨基甾體類化合物均能有效地誘導(dǎo)K562細(xì)胞系向紅系分化，誘導(dǎo)MEG-01細(xì)胞向巨核系分化，但不同的氨基甾體類化合物誘導(dǎo)K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞分化的

8、程度不同。 3.5種氨基甾體作用于K562細(xì)胞和MEG-01細(xì)胞一段時(shí)間后，均能使K562及MEG-01細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]下降，這可能與其阻斷了鈣通道有關(guān)，且細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]的降低可能與氨基甾體對(duì)K562及MEG-01細(xì)胞產(chǎn)生抑制增殖和誘導(dǎo)分化的作用機(jī)制有關(guān)。 4. bcr/abl融合基因5種氨基甾體作用于K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞5d后，均可下調(diào)K562細(xì)胞及MEG-01細(xì)胞內(nèi)的bcr/abl融合基因，但不同的氨