TLR2-3-4-9與HBX在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)研究.pdf

1、目的：通過檢測肝癌、相對應(yīng)的癌旁組織及肝血管瘤肝組織細(xì)胞表面的TLR2、TLR3、TLR4、TLR9、HBx的表達(dá)差異情況，進一步研究TLRs在肝細(xì)胞癌上的表達(dá)特性，初步探討Toll樣受體2、3、4、9、HBx對肝炎及乙肝相關(guān)的原發(fā)性肝癌發(fā)生、發(fā)展機制的影響，揭示TLR2、3、4、9、HBx表達(dá)調(diào)控狀況與肝炎及乙肝相關(guān)的原發(fā)性肝癌之間的關(guān)系，為進一步進行相關(guān)的機制研究奠定實驗基礎(chǔ)。
　　方法：1.直接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢

2、測細(xì)胞表面Toll樣受體2、3、4、9的表達(dá)。收集40例新鮮肝癌、配對的癌旁組織以及8例肝血管瘤肝組織標(biāo)本，進行細(xì)胞消化后經(jīng)FITC標(biāo)記的TLR2、PE標(biāo)記的TLR3、4、9抗體標(biāo)記，采用直接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測新鮮肝癌、相對應(yīng)的癌旁組織及肝血管瘤肝組織細(xì)胞表面Toll樣受體2、3、4、9表達(dá)的平均熒光強度(MFI)及陽性細(xì)胞率；利用CellQuest軟件進行參數(shù)獲取和資料分析；統(tǒng)計學(xué)分析均采用SPSS17.0完成。

3、　　2.免疫組化染色法檢測臨床肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本Toll樣受體2、3、4、9、HBx的染色程度。收集110例肝癌包埋石蠟組織及配對的癌旁組織、10例肝血管瘤包埋石蠟組織，對120例石蠟塊切片后進行免疫組化染色方法檢測肝癌和癌旁組織、肝血管瘤肝組織中Toll樣受體2、3、4、9、HBx的表達(dá)，利用Image-ProPlus6.0軟件進行組化圖像分析。統(tǒng)計學(xué)分析均采用SPSS17.0完成。
　　結(jié)果：1.直接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)(FCM)

4、檢測Toll樣受體2、3、4、9的表達(dá)結(jié)果顯示：肝癌組織及相對應(yīng)的癌旁組織以及肝血管瘤肝組織中所消化的肝細(xì)胞和淋巴細(xì)胞TLR2、TLR3、TLR4、TLR9的表達(dá)的平均熒光強度(MFI)及陽性細(xì)胞率水平略有所不同，總體上來說TLR2、TLR4在肝癌組織的表達(dá)顯著低于相對應(yīng)的癌旁組織以及肝血管瘤肝組織，TLR3、TLR9在肝癌組織的表達(dá)則高于相對應(yīng)的癌旁組織以及肝血管瘤肝組織的表達(dá)。
　　2．免疫組化染色法檢測Toll樣受體2、3、

5、4、9、HBx的表達(dá)結(jié)果顯示：肝癌、相對應(yīng)的癌旁組織及肝血管瘤肝組織細(xì)胞染色觀察顯示，TLR2表達(dá)位于細(xì)胞漿內(nèi)，癌、癌旁、肝血管瘤肝組織的表達(dá)率分別為6.4％、7.2%、2%，均為弱表達(dá)（p<0.05）；TLR3表達(dá)位于細(xì)胞核漿內(nèi)，癌、癌旁、肝血管瘤肝組織的表達(dá)率分別為為74%、63%、40%，癌組織內(nèi)表達(dá)量高于癌旁組織，肝血管瘤肝組織相對弱表達(dá)（p<0.05）；TLR4表達(dá)位于細(xì)胞漿內(nèi)，癌、癌旁、肝血管瘤肝組織的表達(dá)率分別為22%、8

6、8%、70%,癌中的表達(dá)明顯低于癌旁組織中的表達(dá)（p<0.05）；TLR9表達(dá)位于細(xì)胞漿和核內(nèi)，癌、癌旁、肝血管瘤肝組織的表達(dá)率分別為78%、73%、60%，癌細(xì)胞中的表達(dá)高于癌旁組織中的表達(dá)（p<0.05）；
　　3．Toll樣受體2、3、4、9、HBx的表達(dá)與肝癌臨床病理學(xué)特征比較結(jié)果：表達(dá)可能與分化程度有關(guān)，(x2=7.031P<0.05)，而表達(dá)陽性率與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。
　　結(jié)論

7、：本課題實驗研究表明1.TLR2、4、HBx的表達(dá)低于與癌旁非癌組織，這可能提示在HBV感染的肝臟組織中TLR2、4在肝癌中下調(diào)了機體對HBV感染的肝癌細(xì)胞的免疫監(jiān)視作用，從而逃避抗病毒途徑，在HBV誘導(dǎo)的肝癌肝臟炎癥損傷中存在免疫逃避作用。2.TLR3、9癌組織的表達(dá)高于癌旁非癌組織中的表達(dá)。這表明有可能提示在HBV感染的肝臟組織中TLR3、9在肝癌中未能限制病毒的復(fù)制對有肝損傷作用，在肝癌的發(fā)生與發(fā)展中起到一定的促進作用。3.TLR