一、Spike蛋白來源B細(xì)胞表位多肽及抗體在SARS冠狀病毒感染中作用機(jī)制研究;二、EV71病毒基因工程亞單位疫苗的制備及鑒定.pdf

1、嚴(yán)重急性呼吸綜合征(severeacuterespiratorysyndromeSARS)是由SARS冠狀病毒((SARS-CoV)引起的急性呼吸道傳染病。SARS傳播速度快、范圍廣、死亡率高，被稱為21世紀(jì)初最烈性的傳染病之一。SARS是由冠狀病毒家族的新成員-SARS冠狀病毒(SARS-Co均引起，它既不是任何一種己知冠狀病毒的突變體，也不是己知冠狀病毒的重組體，是一種未知的冠狀病毒。該病病死率較高，尤其是65歲以上的老人可超過50

2、％'02oSARS病毒作為一種新的冠狀病毒，其毒力遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其它己知的家族成員，目前尚無有效治療SARS的抗病毒藥物。人們普遍認(rèn)為，研制一種安全有效的疫苗、開展人群免疫預(yù)防是阻止SARS再次流行最有效的方式。目前，己出現(xiàn)多種有發(fā)展前景的SARS-CoV疫苗形式，包括滅活病毒疫苗、基于SARS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白制備的DNA疫苗、活病毒載體疫苗等，表位疫苗是近年來新近發(fā)展起來的疫苗形式，安全性好，誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)針對性強(qiáng)。在我們的研究中，利用SA

3、RS-CoVSpike蛋白來源B細(xì)胞表位多膚及其產(chǎn)生的單克隆抗體在SARS-CoV感染細(xì)胞及體內(nèi)的過程中進(jìn)行作用，對其作用效應(yīng)加以描述，同時對其作用機(jī)制加以探討，以期對SARS-CoV疫苗的研制工作提供有力的科學(xué)依據(jù)。本研究中，我們首先在體外利用SARS-CoVSpike蛋白來源的四種B細(xì)胞表位多膚所產(chǎn)生的單克隆抗體在SARS-CoV感染Vero-E6細(xì)胞時進(jìn)行作用，在篩選得到對病毒感染有中和作用抗體的同時，發(fā)現(xiàn)其中郵(s97zs)多膚

4、所制備的單克隆抗體S(s97-s2s3-3-14在病毒感染的過程中表現(xiàn)出隨抗體濃度增加而細(xì)胞受感染增強(qiáng)的現(xiàn)象。隨后我們對四種多膚進(jìn)行不同組合，先后免疫了h-ACE2轉(zhuǎn)基因C57小鼠及恒河猴，經(jīng)檢測動物體內(nèi)特異性抗體達(dá)到穩(wěn)定水平后，進(jìn)行SARS-CoV感染，分別于攻毒后2天與6天時間點(diǎn)安樂動物，觀察SARS-CoV作用靶器官肺組織的病理學(xué)變化及肺組織內(nèi)SARS-CoV載量，發(fā)現(xiàn)仍然是郵(597-625)多膚免疫的C57小鼠或恒河猴攻毒后在

5、肺組織病理學(xué)改變上表現(xiàn)出嚴(yán)重的肺間質(zhì)性肺炎癥狀，病毒載量較對照組及其它免疫組增加。根據(jù)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們又設(shè)計應(yīng)用高、低兩組濃度的S(sm-62s)43-3-14抗體靜脈注射于恒河猴體內(nèi)，攻毒后仍選擇相同的時間點(diǎn)安樂恒河猴觀察病理學(xué)變化及肺組織的SARS-CoV載量，發(fā)現(xiàn)肺組織病理性損傷程度及病毒載量隨抗體濃度的升高而增加，說明S(s92s)43-3-14抗體在體外及體內(nèi)都可以增強(qiáng)SARS-CoV的感染。本研究提示，在病毒感染過程中，可能