利用小分子化合物誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞形成角膜上皮樣細(xì)胞的生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的:利用人胚胎干細(xì)胞具有多向分化潛能的特性，使用小分子化合物特異性作用于調(diào)節(jié)表皮外胚層及角膜上皮細(xì)胞分化發(fā)育過程中重要信號通路的某些調(diào)控位點(diǎn)，結(jié)合β-FGF，誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞方向分化，以獲得角膜上皮樣細(xì)胞。
　　方法:懸滴法培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞，獲得具有向三個胚層分化潛能的擬胚體(Embryonic bodies，EBs)。將獲得的擬胚體于3D培養(yǎng)體系中懸浮培養(yǎng)，利用小分子化合結(jié)合β-FGF，誘導(dǎo)擬胚體逐步向外胚層、

2、表皮外胚層、角膜上皮樣細(xì)胞方向分化。懸浮培養(yǎng)4天后轉(zhuǎn)為貼壁培養(yǎng)，利用貼壁誘導(dǎo)培養(yǎng)條件及不同種類誘導(dǎo)培養(yǎng)基，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞方向分化。分別于誘導(dǎo)第10、20、30天取材，從基因水平、細(xì)胞水平檢測Oct4、p63、pax6、K12、K14表達(dá)水平，判斷各組分化程度及分化效率。
　　結(jié)果:小分子化合物可下調(diào)干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)水平，上調(diào)角膜上皮樣細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物表達(dá)水平;小分子化合物可誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞方向分化;小

3、分子化合物結(jié)合不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基在不同誘導(dǎo)階段調(diào)控基因表達(dá)水平效率不同。
　　結(jié)論:小分子化合物聯(lián)合β-FGF，通過特異性阻斷Wnt、TGF-β信號通路，可誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向角膜上皮樣細(xì)胞方向分化。在誘導(dǎo)分化過程中，干細(xì)胞標(biāo)記基因表達(dá)水平下調(diào)，角膜上皮細(xì)胞發(fā)育調(diào)控基因及角膜上皮細(xì)胞特征性標(biāo)記基因表達(dá)水平上調(diào)。與基礎(chǔ)培養(yǎng)基組（陰性對照組）、基礎(chǔ)培養(yǎng)基-誘導(dǎo)培養(yǎng)基組（陽性對照組）、誘導(dǎo)培養(yǎng)基-誘導(dǎo)培養(yǎng)基組（陽性對照組）相比，小分子化合物誘