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文檔簡介
1、目的:探討p53靶基因Rap2B對腫瘤細胞骨架的調(diào)節(jié)作用及其分子機制,探索Rap2B在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及其具體機制。
方法:熒光顯微鏡下觀察U2OS細胞pcDNA3、pcDNA3-Myc-Rap2B、pcDNA3-Myc-Rap2B(C180A)三種質(zhì)粒分別與pcDNA3-EGFP共轉(zhuǎn)染后細胞的形態(tài)變化;Western Blot檢測H1299(p53-null)和U2OS(wild-type p53)細胞加入nocoda
2、zole后對Rap2B及p53表達的影響;流式細胞儀檢測nocodazole對H1299和U2OS細胞周期的影響;Western Blot檢測Rap2B對H1299和U2OS細胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin D3的影響;流式細胞儀檢測Rap2B對H1299和U2OS細胞周期的影響;Western Blot檢測U2OS細胞nocodazole同步化后釋放p53、Rap2B和Cyclin B1的表達;免疫熒光
3、法F-actin染色熒光顯微鏡下觀察Rap2B對U2OS細胞骨架的影響;免疫熒光法DAPI染色在熒光顯微鏡下觀察Rap2B對U2OS細胞核的影響;免疫熒光法α-tublin染色熒光顯微鏡下觀察Rap2B對U2OS細胞骨架的影響。
結(jié)果:1)Rap2B過表達抑制腫瘤細胞鋪展;2)nocodazole誘導(dǎo)p53及依賴p53誘導(dǎo)的Rap2B蛋白的表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);3) nocodazole誘導(dǎo)腫瘤細胞G2/M期
4、阻滯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);4) Rap2B對腫瘤細胞細胞周期無影響,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);5)Rap2B并非細胞周期蛋白,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);6)Rap2B通過調(diào)節(jié)F-actin抑制腫瘤細胞鋪展;7)Rap2B保護細胞核的完整性,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);8) Rap2B通過調(diào)節(jié)α-tublin影響細胞骨架。
結(jié)論:nocodazole誘導(dǎo)依賴p53的Rap2B激活后,通過與細胞
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