80株中國(guó)大陸新生隱球菌環(huán)境株表型和分子特征的初步研究.pdf

1、研究背景:新生隱球菌所致的感染好發(fā)于細(xì)胞免疫功能低下患者，隨著器官移植、骨髓移植等新技術(shù)的發(fā)展以及AIDS患者的增多，隱球菌感染的發(fā)生率也呈逐年明顯上升的趨勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)新生隱球菌是隱球菌屬的重要致病菌，屬環(huán)境腐生菌，可從土壤和鴿糞中分離到，并被認(rèn)為是人和動(dòng)物最主要的傳染源，主要引起人的腦膜炎和肺炎。隱球菌病，存在顯著的死亡率，但只有稀缺的流行病學(xué)數(shù)據(jù)存在。國(guó)內(nèi)的研究大都集中于臨床株，本研究擬對(duì)中國(guó)大陸新生隱球菌的環(huán)境株的基因型和分子特征

2、進(jìn)行初步分析，以期進(jìn)一步了解環(huán)境株與臨床株之間內(nèi)在的關(guān)系。我們?cè)噲D進(jìn)行從中國(guó)大陸不同地區(qū)鴿子糞中對(duì)隱球菌環(huán)境分離，從隱球菌病的病原特征、毒力、基因型等生物學(xué)特性進(jìn)行了概述，并對(duì)人新生隱球菌病的傳染和流行的基本環(huán)節(jié)、發(fā)病機(jī)制、臨床表現(xiàn)、防治等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。力求建立監(jiān)測(cè)計(jì)劃，以防止感染。
　　 研究目的:本研究旨在了解中國(guó)大陸地區(qū)新生隱球菌環(huán)境株的分布情況及其表型和基因型特征。
　　 研究方法:
　　 1

3、.實(shí)驗(yàn)對(duì)象:我們采用CACA培養(yǎng)基培養(yǎng)了1372份來(lái)自中國(guó)大陸東、西、南、北、中大部分地區(qū)私人和公共養(yǎng)鴿場(chǎng)所的鴿糞標(biāo)本，共分離得到80株新生隱球菌。另有新生隱球菌臨床株及標(biāo)準(zhǔn)株作為對(duì)照。
　　 2.實(shí)驗(yàn)方法:
　　 2.1鴿糞中分離新生隱球菌:獲得新生隱球菌環(huán)境株。
　　 2.2新生隱球菌毒性因子:我們意在了解在新生隱球菌毒力表型特征。
　　 2.2.1莢膜:印度墨汁染色。
　　 2.2.2黑色素

4、:隱球菌在含酚混合物的營(yíng)養(yǎng)基生長(zhǎng)并合成黑色素。
　　 2.2.3尿素酶試驗(yàn)
　　 2.2.437℃生長(zhǎng)試驗(yàn):影響致病真菌生長(zhǎng)的一個(gè)最重要的因素是溫度。在體外條件下，隱球菌屬中的其他中很少能在37℃下生長(zhǎng)。
　　 2.3.分子生物學(xué)研究:M13-PCR結(jié)合ITS序列分析
　　 2.4.動(dòng)物毒力試驗(yàn)
　　 結(jié)果:
　　 新生隱球菌環(huán)境株分離陽(yáng)性率約5.5％，所有菌株37℃生長(zhǎng)良好，有完整的莢膜

5、，尿素酶試驗(yàn)陽(yáng)性，ITS序列分析證實(shí)它們都屬于血清型A。M13-PCR顯示，它們的基因型為我國(guó)及東南亞地區(qū)特征性的VNIc型，顯示了與臨床株的高度一致性。
　　 結(jié)論:中國(guó)大陸地區(qū)的隱球菌臨床株與環(huán)境株顯示了高度的同源性，提示對(duì)于易感人群，阻斷與相應(yīng)環(huán)境的接觸可有效防止新生隱球菌的感染。
　　 調(diào)查結(jié)果顯示來(lái)源于集鴿鴿糞的分離率高于公共廣場(chǎng)?？赡艿脑蚴?，利用各地集鴿時(shí)間采集的鴿糞基本來(lái)自每戶私人鴿友，其通風(fēng)不良，鴿棚中

6、地面和籠子中堆積的鴿糞也更厚，這些條件可能為新生隱球菌在鴿糞中生長(zhǎng)繁殖提供了更為適宜的條件。另外，分離率還與地域相關(guān)，按照北緯200N～500N劃分的3個(gè)區(qū)域，鴿群的標(biāo)本分離率以200N～300N最高(G3，15.25％)，其次為400N～500N(G1，5.45％)，300N～400N(G2，5.1％)最低?？赡艹伺c飼養(yǎng)條件、鴿子的活動(dòng)習(xí)性、運(yùn)動(dòng)遷徙等有關(guān)外，還與氣候條件緊密相關(guān)。提示相應(yīng)的自然環(huán)境（溫帶）更適合該真菌的生存。這些原