去甲基化藥物聯(lián)合DLI治療多發(fā)性骨髓瘤的免疫效應(yīng)和機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:多發(fā)性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是惡性增殖性血液腫瘤。去甲基化藥物地西他濱(Decitabine，DAC)單藥及聯(lián)合供者淋巴細(xì)胞輸注(Donor lymphocytes infusion，DLI)治療多發(fā)性骨髓瘤具有良好的應(yīng)用前景。癌—睪丸抗原(Cancer-Testis Antigens，CTAs)具有高免疫原性，受去甲基化機(jī)制調(diào)控，可能是DAC治療多發(fā)性骨髓瘤的作用位點(diǎn)。
　　目的:通過開展一系

2、列體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)，研究地西他濱對(duì)人及小鼠多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，DAC單藥及聯(lián)合DLI強(qiáng)化抗骨髓瘤免疫應(yīng)答的免疫效應(yīng)和機(jī)制，探索骨髓瘤細(xì)胞CTAs抗原表達(dá)的激活機(jī)制，進(jìn)而研究骨髓瘤相關(guān)特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)機(jī)制，為臨床應(yīng)用靶向藥物聯(lián)合供者淋巴細(xì)胞輸注治療MM提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料與方法:用CCK-8法檢測(cè)DAC對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的增殖抑制作用;AnnexinⅤ/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度DAC作用后細(xì)胞凋亡的變化

3、;Western Blot法檢測(cè)DAC作用后細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、caspase-9、total caspase-8及p53的變化;PI染色檢測(cè)細(xì)胞周期變化;用RT-PCR和Q-PCR檢測(cè)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系、原代細(xì)胞和骨髓瘤荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞CTAs表達(dá)情況;構(gòu)建SP2/0及MPC-11骨髓瘤荷瘤小鼠模型，以0.5mg/kg治療劑量DAC單藥或聯(lián)合CB6F1小鼠淋巴細(xì)胞回

4、輸治療骨髓瘤荷瘤小鼠，通過觀察荷瘤小鼠腫瘤大小和生存期評(píng)價(jià)治療作用;通過對(duì)荷瘤小鼠腫瘤組織及脾臟的HE染色、免疫組化及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)反映治療后的組織病理及淋巴細(xì)胞亞群分布變化。
　　結(jié)果:DAC體外能夠顯著抑制人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，可將細(xì)胞阻滯于G2/M期。DAC能體外誘導(dǎo)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系和原代細(xì)胞、體內(nèi)可誘導(dǎo)骨髓瘤荷瘤小鼠腫瘤組織廣泛的CTAs基因表達(dá)上調(diào)。DAC單藥及聯(lián)合DLI與對(duì)照組相比均能明顯抑制骨髓