經ALSS治療的乙肝肝衰竭患者的尿液代謝組學研究.pdf

1、利用以超高效液相色譜.質譜聯用技術(UPLC/MS)為基礎的尿液代謝組學研究方法對接受了非生物型人工肝臟支持系統(tǒng)(ALSS)治療的乙肝肝衰竭患者進行尿液代謝組學研究。評估乙肝肝衰竭患者與正常對照間的尿液代謝譜差異;探討ALSS治療對乙肝肝衰竭患者尿液代謝譜的影響;評估不同預后的乙肝肝衰竭患者間尿液代謝譜的差異并建立預后判斷模型。
　　 研究方法：
　　 篩選接受了ALSS治療的乙肝肝衰竭患者,收集尿液標本并進行3個月轉歸

2、情況的隨訪;考察超高效液相色譜以及四級桿-飛行時間質譜儀的參數設置;對同一樣本重復檢測,考察儀器的重復性和穩(wěn)定性;對UPLC/MS的檢測數據進行多變量數據分析,采用模式識別技術考察尿液代謝譜的組間差異,篩選生物標記物,建立預后判斷模型并與終末期肝病模型(MELD)進行比較。
　　 研究結果：
　　 建立了穩(wěn)定可靠的采用UPLC/MS進行乙肝肝衰竭患者尿液代謝組學研究的方法。對乙肝肝衰竭組和正常對照組的尿液代謝信息進行多變

3、量分析,發(fā)現尿液代謝組學數據可將對照組和乙肝肝衰竭患者分別聚類區(qū)分。鑒定了對分組貢獻較大的五類物質,分別是肌酸酐、肉毒堿、α-N-苯乙酰-L-谷氨酰胺(PAGN)、馬尿酸以及甜菜堿。這五類物質在患者尿液中的含量均顯著低于對照組,提示乙肝肝衰竭患者腎功能以及肝臟的脂類、氨基酸的代謝功能異常。
　　 ALSS治療前后的尿液代謝譜有顯著的不同,可分別聚類于不同的區(qū)域中。尿液中的PAGN是NH3的排泄載體,其含量在ALSS治療后降低明顯

4、,提示ALSS治療可顯著降低乙肝肝衰竭患者的血氨水平。
　　 好轉組和惡化組患者經多變量數據分析分別聚類,表明代謝組學技術可作為一種新的技術手段應用于乙肝肝衰竭患者預后判斷的研究。兩組患者間差異最顯著的代謝物質分別是肌酸酐和甘氨鵝脫氧膽酸。二者在惡化組患者尿液中的含量均明顯低于好轉組患者,提示惡化組患者膽固醇代謝以及腎功能的受損均較好轉組患者嚴重。另外,甘氨鵝脫氧膽酸在兩次ALSS治療前后的變化程度在兩組不同預后患者間的差異有顯

5、著統(tǒng)計學意義,提示甘氨鵝脫氧膽酸在ALSS治療過程中的特異性變化可能有助于對乙肝肝衰竭患者預后的判斷。
　　 不同預后的兩組乙肝肝衰竭患者間,其第一次ALSS治療后48-72小時的尿液代謝譜的差異較其他四個時間點大。以含量在兩組不同預后患者間有顯著差異(P＜0.05)的901個變量建立新的雙向正交偏最小二乘法(OPLS/O2PLS)模型。經驗證,該模型可靠,且模型的累積預測度較基于8792個變量的OPLS/O2PLS模型的累積預

6、測度有所提高。將901個變量進行Logistic回歸建模及受試者工作特征曲線(ROC曲線)評估,新模型的預測能力以及診斷能力良好。其ROC曲線的曲線下面積、標準誤以及95％的置信區(qū)間等指標均優(yōu)于MELD。
　　 結論：
　　 UPLC/MS作為代謝組學研究的常用檢測工具,用于尿液代謝組學研究具有高靈敏度和高特異性的特點。通過對乙肝肝衰竭組與正常對照組、ALSS治療前后以及不同預后的乙肝肝衰竭患者的尿液代謝譜的研究,發(fā)現基