阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征和非小細胞肺癌的遺傳學(xué)研究.pdf

1、肥胖及炎癥因素均參與阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征（OSAS）的發(fā)病。白細胞介素-6（IL-6）是肥胖及炎癥的重要調(diào)節(jié)因子之一，且與OSAS發(fā)病率增加密切相關(guān)。本研究旨在探討IL-6的遺傳變異與OSAS易感性的關(guān)系。 研究對象為中國華東地區(qū)151例OSAS患者及75例健康對照者。通過Haploview4．1選擇了IL-6基因上21kb范圍內(nèi)的5個標簽單核苷酸多態(tài)性位點（htSNPs）。運用聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）擴增上述htSNPs，

2、擴增產(chǎn)物以限制性酶切及凝膠電泳進行基因分型。通過SHEsis程序進行連鎖不平衡（LD）分析及單倍型構(gòu)建。利用回歸分析計算優(yōu)勢比（Odd ratios，OR）和95％可信區(qū)間（95％ confidence intervals，95％ CI），并對性別、年齡和BMI進行校正。 研究結(jié)果表明： 1、上述5個htSNPs位點在OSAS患者及健康對照者中的分布均無差異。 2、在非肥胖組（n=117）， IL-6單核苷酸多態(tài)

3、性位點rs1800796（-572G/C）的G等位基因攜帶者患OSAS的風(fēng)險低于C等位基因攜帶者（OR=0．48；95％ CI，0．26-0.86；P=0．014）；-572G/C多態(tài)性的（GG+CG）基因型攜帶者患OSAS的風(fēng)險也低于CC基因型攜帶者（OR=0．38；95％ CI，0．17-0.88；P=0．008）。 3、非肥胖者單倍型TG（rs1880242及rs1800796）攜帶者患OSAS的風(fēng)險明顯低于其他單倍型攜帶

4、者（OR=0．39；95％ CI，0．20-0.74，P=0．003）。 4、非肥胖者睡眠呼吸障礙的嚴重程度（以AHI表示，次/h）與IL-6-572G/C的C多態(tài)性位點攜帶率呈線性關(guān)系（GG基因型：14．3±5．1，CG基因型：22．0±3．6及CC基因型：34．8±3．5；P=0．012）。 本研究結(jié)果提示在非肥胖者中，IL-6-572G/C多態(tài)性中的CC基因型和C等位基因增加了OSAS患病風(fēng)險，而GG基因型和G等位

5、基因則對OSAS發(fā)病有保護作用。一些單倍型對OSAS的易感性也有影響。本研究在國內(nèi)外首次揭示了IL-6的遺傳變異與OSAS易感性有關(guān)。IL-6 SNP基因分型可能成為非肥胖人群睡眠呼吸暫停綜合征患病風(fēng)險的檢測方法之一。 IL-6是一種重要的細胞因子，它在免疫應(yīng)答、細胞生長、增值和凋亡等過程中發(fā)揮重要作用。研究表明IL-6及其主要效應(yīng)物STAT3促進多種癌癥的形成，其中包括肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、黑色素瘤及各種血癌。大量數(shù)

6、據(jù)表明，基因的常見變異可以影響常見疾病的遺傳易感性。IL-6基因中存在較多的多態(tài)性位點，其中rs1800795（-174G/C）、rs1800796（-572C/G）和rs10499563（-6331T/C）是三個重要的功能性多態(tài)位點，它們可以改變IL-6的轉(zhuǎn)錄活性，調(diào)節(jié)IL-6的蛋白表達量，從而影響許多常見疾病的遺傳易感性。其中，IL-6-174G/C和-572C/G多態(tài)性與腫瘤易感性的關(guān)系一直是學(xué)者研究的熱點，而-6331T/C多態(tài)

7、性與腫瘤易感性的關(guān)系至今尚未見報道。 為了全面的研究/L-6基因遺傳變異與非小細胞肺癌（NSCLC）易感性的關(guān)系，我們通過Haploview軟件選擇了4個單倍型標簽單核苷酸多態(tài)性位點（haplotype tagging SNP，htSNP）來進行基因分型，它們覆蓋了IL-6基因的單倍型區(qū)塊。這4個htSNP位點多態(tài)性通過PCR—限制性酶切片段長度多態(tài)性（PCR—restrictionfragment length polymor

8、phism， PCR—RFLP）的方法對121例NSCLC患者和112例正常對照個體進行基因分型。 采用SPSS16．0統(tǒng)計包，利用回歸分析對性別、年齡和抽煙史進行校正，我們發(fā)現(xiàn)4個htSNP（rs1880242、rs10499563、rs1800796和rs2069837）的基因型及等位基因頻率在患者與正常對照中的分布均無顯著差異。采用SHEsis程序進行單倍型重構(gòu)與分析發(fā)現(xiàn)，單倍型GTGA在NSCLC病人中的頻率明顯高于正常

9、對照組（7．2％ vs．1．9％，P=0．004），提示該單倍型顯著增加了NSCLC的易感性（OR，4．50；95％ CI，1．49-13．53）。我們的研究表明，在漢族人群里IL-6基因區(qū)域的常見變異與NSCLC的易感性相關(guān)，其作用機制有待進一步研究。 E—cadherin是跨膜糖蛋白家族的一員，在上皮細胞粘附、維持上皮完整性以及細胞分化過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。大量的實驗數(shù)據(jù)表明多種上皮癌變過程中可見E—cadherin表達

10、下調(diào)或表達缺失。E—cadherin mRNA和蛋白的表達下降也多見于我國的NSCLC患者，但是我們先前的研究發(fā)現(xiàn)E—cadherin的基因變異在NSCLC患者中并不常見。這提示我們NSCLC患者中E—cadherin基因的表達減少可能是由于表觀遺傳學(xué)機制而導(dǎo)致的。據(jù)此，我們推測E—cadherin基因的甲基化參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程。 我們從35例NSCLC患者的癌組織和癌旁正常組織中提取DNA，并用重亞硫酸鹽修飾，并

11、對修飾的DNA直接測序的方法來檢測E—cadherin基因5’端CpG島的甲基化情況。隨后，我們采用實時定量PCR（RT—PCR）分析E—cadherin基因的mRNA表達量。甲基化分析顯示：28．6％（10/35）的癌組織存在至少一處E—cadherin基因的甲基化，而在與甲基化的癌組織對應(yīng)的癌旁組織中有60％（6/10）的個體未發(fā)現(xiàn)E—cadherin基因的甲基化。這提示我們E—cadherin基因5’端可能存在癌癥特異的甲基化位點

12、。RT—PCR結(jié)果顯示：E—cadherin基因甲基化的10個NSCLC患者中，70％（7/10）的個體癌組織E—cadherin基因mRNA表達量高于對應(yīng)的癌旁對照組織；在E—cadherin未甲基化的25個NSCLC患者中，64％（16/25）的個體癌組織E—cadherin基因mRNA表達量高于對應(yīng)的癌旁對照組織。統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)E—cadherin基因的mRNA表達降低與E—cadherin基因5’端的甲基化并無明顯相關(guān)性。NSCL