Ⅰ-Ⅳ型登革病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1通用型單克隆抗體的制備及NS1抗原檢測ELISA方法的建立.pdf

1、登革病毒（dengue virus，DV或DENV）可以感染人類并導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床疾病[3]，引起的登革出血熱和登革休克綜合征病死率高。因些對登革病毒感染患者的早期診斷有很重要的意義。登革病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1具有較強(qiáng)的免疫原性，早期即可出現(xiàn)在感染了登革病毒的患者血清中，且出現(xiàn)時間早于IgM抗體，有研究表明其可以用于登革熱的早期診斷以及病情監(jiān)測。因此，NS1有望成為早期診斷登革病毒感染的方法。
　　本課題研究利用生物信息軟件分析四種血

2、清型登革病毒NS1的抗原表位，選擇四種血清型NS1蛋白中共同保守的抗原表位通過與小分子載體BSA偶聯(lián)，通過免疫小鼠以及雜交瘤技術(shù)制備獲得四個型別NS1通用型單克隆抗體23株。同時根據(jù)Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1蛋白基因序列設(shè)計特異性NS1引物，經(jīng)RT-PCR得到四種型別的NS1全基因，并分別克隆到pMD19T載體上，隨后，經(jīng)BamHⅠ和NotⅠ雙酶切將目的片段進(jìn)一步克隆到表達(dá)載體pET30a上，構(gòu)建Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1蛋白BL-21高效表達(dá)