阿司匹林抑制索拉非尼引起的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移潛能增強(qiáng)的機(jī)制研究.pdf

1、肝細(xì)胞肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC，簡(jiǎn)稱“肝癌”）是常見的惡性腫瘤，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已是晚期，不能接受根治性手術(shù)治療，索拉非尼(sorafenib)已成為晚期肝癌患者的的一線治療藥物。但是兩個(gè)針對(duì)索拉非尼的Ⅲ期臨床試驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)，索拉非尼對(duì)晚期肝癌顯示治療效果的同時(shí)，對(duì)患者中位生存期的絕對(duì)值延長(zhǎng)不足3個(gè)月，療效并不十分令人滿意。同時(shí)有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)sorafenib這一類抗血管生成治療在抑制原發(fā)瘤的同時(shí)促進(jìn)了

2、轉(zhuǎn)移瘤的生長(zhǎng)。我們課題組張偉前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)sorafenib治療肝癌，能夠明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)、減少肺轉(zhuǎn)移、延長(zhǎng)荷瘤裸鼠的生存期，但是促進(jìn)了腫瘤的肝內(nèi)播散并增加了外周血腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)。阿司匹林(aspirin)是非甾體類抗炎藥的一種，最早應(yīng)用于解熱、鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕和預(yù)防心血管疾病，最近aspirin在腫瘤防治中的作用也逐漸被人們所認(rèn)識(shí)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合應(yīng)用sorafenib和aspirin能夠明顯減少sorafenib引起的肝內(nèi)播

3、散和外周血腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)的增加。但是aspirin抑制sorafenib引起的腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移增加的具體機(jī)制尚不清楚，本研究進(jìn)行了深入的探索。
　　腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，首先需要腫瘤細(xì)胞本身有很強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，其次腫瘤及癌旁微環(huán)境的刺激起到了推波助瀾的作用，最后機(jī)體內(nèi)環(huán)境的影響對(duì)于腫瘤細(xì)胞能否完成轉(zhuǎn)移并在轉(zhuǎn)移靶器官重新生長(zhǎng)起到了決定性的作用。因此，對(duì)于aspirin抑制sorafenib引起的腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移增強(qiáng)的機(jī)制研究我

4、們從腫瘤細(xì)胞本身、腫瘤及癌旁微環(huán)境以及機(jī)體內(nèi)環(huán)境三方面入手，這里的機(jī)體內(nèi)環(huán)境我們主要集中在血小板與腫瘤細(xì)胞的相互作用這一點(diǎn)。
　　1.Aspirin通過(guò)上調(diào)腫瘤細(xì)胞TIP30表達(dá)抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加
　　TIP30是一個(gè)抑癌基因，在肝癌中TIP30的過(guò)表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，抑制腫瘤的侵襲。前期的研究中我們已經(jīng)證實(shí)了下調(diào)TIP30可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞EMT表型，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究中我們利用

5、高表達(dá)TIP30的HCCLM3細(xì)胞株和TIP30敲除的LM3-Lv-shTIP30細(xì)胞株以及低表達(dá)TIP30的HepG2細(xì)胞株和過(guò)表達(dá)TIP30的HepG2-Lv-TIP30細(xì)胞株進(jìn)行研究。體外實(shí)驗(yàn)顯示Aspirin作用于上述肝癌細(xì)胞株能夠明顯上調(diào)腫瘤細(xì)胞TIP30的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)了sorafenib引起的腫瘤細(xì)胞TIP30表達(dá)下降以及因此誘導(dǎo)的EMT表型，從而減弱了腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)aspirin作用于上述四種肝癌細(xì)胞株的裸

6、鼠原位瘤模型，能夠減少腫瘤的肝內(nèi)播散，WB和免疫組化法檢測(cè)上述標(biāo)本的TIP30表達(dá)證實(shí)了aspirin確實(shí)通過(guò)上調(diào)TIP30表達(dá)抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　2.Aspirin通過(guò)抑制腫瘤及癌旁微環(huán)境中SDF1-α的表達(dá)抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加
　　SDF1又稱為CXCL12，是一種趨化因子，SDF1-α通過(guò)與其受體CXCR4的結(jié)合，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。利用經(jīng)過(guò)sorafenib治療以及聯(lián)合sorafenib和

7、aspirin治療的LM3裸鼠原位瘤標(biāo)本，我們通過(guò)RT-PCR檢測(cè)了一些炎癥相關(guān)細(xì)胞因子在腫瘤和癌旁微環(huán)境中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Sorafenib治療導(dǎo)致腫瘤以及癌旁微環(huán)境中鼠源性SDF1-α的mRNA表達(dá)增加，而聯(lián)合aspirin治療能夠明顯減少微環(huán)境中鼠源性SDF1-α的表達(dá)。針對(duì)SDF1-α治療前后表達(dá)的改變，我們通過(guò)免疫組化及WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)aspirin明顯抑制sorafenib引起的癌旁微環(huán)境中SDF1-α蛋白水平的增加，并通過(guò)EL

8、ISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)aspirin抑制sorafenib引起的外周血鼠源性SDF1-α濃度的升高。我們同時(shí)發(fā)現(xiàn)sorafenib體外作用于肝癌細(xì)胞株不能上調(diào)其SDF1-α的表達(dá)，說(shuō)明sorafenib引起的SDF1-α表達(dá)升高主要來(lái)源于間質(zhì)細(xì)胞而非腫瘤細(xì)胞的分泌。體外實(shí)驗(yàn)顯示rhSDF1-α能夠明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲，并上調(diào)肝癌細(xì)胞VEGF的表達(dá)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明利用CXCR4抑制劑AMD3100能夠明顯減少sorafenib引起的腫瘤肝內(nèi)播散。

9、因此我們認(rèn)為aspirin除了影響腫瘤細(xì)胞本身的侵襲性，還通過(guò)抑制sorafenib引起的腫瘤及癌旁微環(huán)境中SDF1-α的表達(dá)，從而抑制sorafenib引起的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的增強(qiáng)。
　　3.Aspirin抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加與其減少血小板與腫瘤細(xì)胞的相互作用有關(guān)
　　血小板在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。我們發(fā)現(xiàn)Sorafenib治療導(dǎo)致腫瘤血管完整性的破壞，激活的血小板溢出血管腔外后在腫

10、瘤組織內(nèi)浸潤(rùn)，血小板和腫瘤細(xì)胞的接觸可刺激腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT表型，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲性，同時(shí)腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力也增加，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。而聯(lián)合應(yīng)用aspirin可以明顯減少血小板在腫瘤組織中的浸潤(rùn)，從而減少腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論:
　　Aspirin抑制sorafenib引起的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移增強(qiáng)的機(jī)制可以從以下三個(gè)方面解釋:
　　1.Aspirin通過(guò)上調(diào)腫瘤細(xì)胞TIP30表達(dá)抑制sorafeni

11、b引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加。
　　2.Aspirin通過(guò)抑制腫瘤及癌旁微環(huán)境中SDF1-α的表達(dá)抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加。
　　3.Aspirin抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加與其減少血小板與腫瘤細(xì)胞的相互作用有關(guān)。
　　應(yīng)用價(jià)值:
　　本研究從三個(gè)方面解釋了aspirin聯(lián)合sorafenib治療可以抑制單用sorafenib引起的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移增加的機(jī)制，為臨床上通過(guò)合并應(yīng)