葉酸靶向癌細(xì)胞納米熒光探針的制備及其性能研究.pdf

1、碩士學(xué)位論文葉酸靶向癌細(xì)胞納米熒光探針的制備及其性能研究P r e p a r a t i o n a n d P r o p e r t i e so f F o l a t e —t a r g e t e dC a n c e rF l u o r e s c e n c e N a n o p r o b e作者姓名： 整熊學(xué)科、 專業(yè)：學(xué) 號(hào)：生物化工2 1 2 1 8 1 2 6大連理工大學(xué)D a l i a n U n i

2、 V e r s i t y o f T e c h n o l o g y大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘 要粒徑在1 0 0 ~ 2 0 0n m 的納米粒子具有良好的增強(qiáng)性滲透及滯留( E 1 1 1 1 a n c e dp e n n e a t i o na J l dr e t e n t i o n e f f e c t ，E P R ) 效應(yīng)，有望解決目前癌癥檢測(cè)準(zhǔn)確率低、邊緣不清的問(wèn)題，已成為癌癥靶向檢測(cè)定位和治療的研究

3、熱點(diǎn)。研究表明，具有良好水溶性和相容性的右旋糖酐可以通過(guò)自組裝的方法，獲得粒徑在1 0 0 ～2 0 0n m 的納米粒子，但在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步添加葉酸( F o l i ca c i d ，F(xiàn) A ) 作為靶向分子，通過(guò)主動(dòng)靶向與被動(dòng)靶向結(jié)合以提高粒子靶向作用從而實(shí)現(xiàn)癌癥檢測(cè)定位的研究非常少。本論文通過(guò)自組裝的方式，制備以葉酸為靶向分子、熒光標(biāo)記的粒徑為1 0 0 ~ 2 0 0 m 的右旋糖酐粒子( D e x ．D C A ．F I

4、 ／F A N P s ) ，使其作為納米癌細(xì)胞探針以實(shí)現(xiàn)主動(dòng)靶向與被動(dòng)靶向的結(jié)合檢測(cè)并對(duì)其性能進(jìn)行研究。研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面：1 ．利用疏水的脫氧膽酸( D e o x y c h o l i ca c i d ，D C A ) 對(duì)右旋糖酐進(jìn)行修飾，利用自組裝的方法，并通過(guò)對(duì)初始濃度及去離子水滴加速度的優(yōu)化，制得直徑峰值1 6 7 ．5n m 且分布均一的脫氧膽酸修飾的右旋糖酐納米粒子。但粒子的穩(wěn)定性并不理想，需進(jìn)行改進(jìn)。2 ．在

5、D e x —D C A 的基礎(chǔ)上增加氨基，通過(guò)自組裝的方法，制得多種粒徑在1 0 0 ~ 2 0 0啪的氨基化脫氧膽酸修飾右旋糖酐納米粒子( D e x ．D C A ．N H 2N P s ) 。由于氨基的靜電排斥作用，D e x ．D C A - N H 2 N P s 在溶液中的穩(wěn)定性大幅提高，可以存放1 5 天以上且在細(xì)胞培養(yǎng)液中4 h 內(nèi)粒徑仍在1 0 0 ～2 0 0 I m l 。3 ．在D e x ．D C A ．N

6、H 2 的基礎(chǔ)上修飾異硫氰酸熒光素( F l u o r e s c e i n i s o t h i o c y a n a t e ，F(xiàn) I T C )作為熒光標(biāo)記物、葉酸作為靶向分子，通過(guò)自組裝的方法，制得三種具有熒光且粒徑在1 0 0 ～2 0 0m 的葉酸靶向F I T C 標(biāo)記的脫氧膽酸修飾右旋糖酐納米粒子( D e x ．D C A ．F I ／F AN P s ) ，三種納米粒子在溶液中的穩(wěn)定性良好，可以存放1 4 天

7、以上，在細(xì)胞培養(yǎng)液中4h 內(nèi)粒徑仍2 0 0 n m 左右。4 ．D e x —D C A ．F I2 0o ．5 ／F A o ．5 N P s ( 上標(biāo)表示D e x ．D C A ．F I 合成時(shí)F I T C 和氨基的投料比，下標(biāo)分別表示D e x ．D C A —F I T C 和D e x —D C A ．F A 的含量) 對(duì)葉酸受體( F R ) 過(guò)量表達(dá)的F R ( + ) 組和F R 表達(dá)量較少的F R ( ．) 組癌

8、細(xì)胞具有一定的區(qū)分能力；D e x ．D C A ．F I5 0o ．7 5 ／F Ao ．2 5 N P s 對(duì)F R ( + ) 組和F R ( ．) 組癌細(xì)胞具有明顯的區(qū)分能力，滿足檢測(cè)要求。且兩種納米粒子在濃度較低時(shí)對(duì)M C F ．7 細(xì)胞、H e l a 細(xì)胞、A 5 4 9 細(xì)胞的細(xì)胞毒性都很小，并都具有良好的血液相容性，有望進(jìn)一步進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)或通過(guò)改變標(biāo)記物或靶向分子進(jìn)行性能的改良。關(guān)鍵詞：癌細(xì)胞靶向檢測(cè)；納米粒子；葉