白果對(duì)致敏性哮喘小鼠模型的作用.pdf

1、背景：過(guò)敏性哮喘(allergic asthma)是一種慢性氣道炎癥，其特點(diǎn)為氣道可逆性阻塞和氣道高反應(yīng)性。有證據(jù)表明，氣道的炎癥與Th2型CD<,4><'+>T細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)、B細(xì)胞等炎癥細(xì)胞有關(guān)，這些細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子和炎性蛋白之間的相互作用參與了哮喘的形成。近期的研究認(rèn)為由Th2分泌的IL一4、IL一5參與了過(guò)敏性炎癥反應(yīng)。人類和小鼠基因圖譜研究也已證實(shí)IL一4、IL一5是哮喘的相關(guān)基因。目前中藥對(duì)哮喘研究報(bào)道日益增

2、多，但研究單味白果對(duì)哮喘作用報(bào)道甚少。 目的：研究白果注射液(腹腔內(nèi)注射)對(duì)于支氣管哮喘(哮喘)小鼠氣道炎癥、II型T輔助淋巴細(xì)胞(Th2)、血漿中IgE的影響，通過(guò)比較不同干預(yù)措施(正常組、致敏組、白果注射組)對(duì)小鼠哮喘模型的影響，探討應(yīng)用白果注射液有效成分對(duì)治療支氣管哮喘的可行性及作用機(jī)制。 方法： 第一部分：6--8周的雌性BALB／c小鼠共20只，隨機(jī)分為2組：正常組、致敏組，每組10只小鼠，致敏組小鼠

3、在第0、7、14天腹腔注射OVA混懸液致敏。正常組生理鹽水替代OVA混懸液進(jìn)行腹腔內(nèi)注射，第1 5~20天所有小鼠一起吸入OVA霧化溶液進(jìn)行激發(fā)，每天一次每次20分鐘，末次激發(fā)24小時(shí)后麻醉處死小鼠，眼球取血測(cè)IgE，全血離心后析出血清，測(cè)血清中的細(xì)胞因子。作支氣管肺泡灌洗液(BALF)的細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞因子檢測(cè)，并進(jìn)行肺組織學(xué)檢查。 第二部分：6-8周的雌性．BALB／c小鼠共45只，隨機(jī)分為3組：正常組、致敏組、白果注射組，

4、分組后建立小鼠哮喘模型。除正常組外，其它二組小鼠在第0、7、14天腹腔注射OVA混懸液致敏，正常組采用生理鹽水替代OVA混懸液進(jìn)行腹腔內(nèi)注射，第15~20天所有小鼠一起吸入OVA霧化溶液進(jìn)行激發(fā)，每天一次每次20分鐘，其中白果注射組霧化前進(jìn)行藥物干預(yù)，末次激發(fā)24小時(shí)后麻醉處死小鼠，取外周血測(cè)IgE并測(cè)血清中的細(xì)胞因子；作支氣管肺泡灌洗液(BALF)的細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞因子檢測(cè)；并進(jìn)行肺組織學(xué)檢查。無(wú)菌操作取出脾臟，將其在金屬網(wǎng)上磨碎以制備

5、單細(xì)胞懸液，細(xì)胞調(diào)至2 X 10<'5>/ml，加入OVA作為抗原刺激。脾細(xì)胞懸液置于5％C0z的潮濕環(huán)境中，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，檢測(cè)細(xì)胞因子． 結(jié)果： 第一部分：致敏組細(xì)胞總數(shù)(9.87±1.48×i0。／m1)和正常組(3.61±0.31×i0<'5>／m1)相比顯著增加(P<0.01)，并且EOS、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞百分比明顯增加(P<0．01)。與正常組相比，致敏組BALF中Th2細(xì)胞因子

6、IL-4(13.15+2.43vs 72.77±6.87)、IL-5(29.51±3.81vs90.57±8.63)顯著升高(P<0.01)。血清中Th2細(xì)胞因子結(jié)果與BALF類似，與正常組比較，致敏組小鼠血清中Th2細(xì)胞因子IL-4(28.97±4.22vs128.89±12.25)、IL-5(78.75±10.73 VS 241.63±18.27)顯著上升(P<0.01)。與正常組比較，致敏組血漿中IgE(6.07±0.69 vs5

7、7.89±7.25)顯著上升(p<0.01)。肺組織學(xué)檢查結(jié)果顯示：和正常組相比，致敏組小鼠肺組織切片見(jiàn)EOS、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)細(xì)支氣管、肺泡等組織。第二部分：結(jié)果表明，吸入OVA后致敏組小鼠肺部發(fā)生了明顯的過(guò)敏性反應(yīng)的炎癥變化。致敏組細(xì)胞總數(shù)(8.98±2.12×10<'5>ml)比正常組(2.79±0.44×10<'5>／ml)顯著增加(P<0.01)，并且EOS、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞百分比明顯增加(P<0.01)，與正常組相

8、比，致敏組BALF中Th2細(xì)胞因子 IL-4(14.98±3.79vs72.82±6.25)、 IL-5(39.97±6.19vs117.16±9.27)顯著升高(P<0.01)；與正常組相比，致敏組血清中細(xì)胞因子IL-4(30.17±3.87 VS 131.19±12.25)、 IL-5(80.75±11.76vs252.13±17.27)，脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-4(78.97±3.96vs151.79±14.56) IL-

9、5(137.89±18.75vs578.98±30.12)顯著升高(P<0.01)；與正常組比較，致敏組血漿中IgE(6.34±0.78 vs67.24±8.79)顯著上升(p<0.01)。白果組可減少細(xì)胞總數(shù)(4.13±1.03 X 10<'5>／ml)，各類炎癥T細(xì)胞、EOS、中性粒細(xì)胞百分比下降，明顯減少肺部的Th2細(xì)胞因子IL-4(30.13±3.12)、 IL-5(61.87±4.87)；血清中細(xì)胞因子IL-4(78.17±8

10、.97)、IL-5(167.12±16.27)，脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-4(101.26±15.17)、IL-5(412.89±26.79)與致敏組比較差異顯 著(P<0.01)，血漿中IgE水平(38.87±9.72)與致敏組比較差異顯著(P<0.01)；肺組織學(xué)檢查結(jié)果顯示：和正常組相比，致敏組小鼠肺組織切片見(jiàn)EOS、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞漫潤(rùn)支氣管、肺泡等組織，白果注射組消除了肺內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。結(jié)論：IL-4、IL