黃褐毛忍冬總皂苷對卵清蛋白致敏小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用.pdf

1、第一部分金銀花有效成分篩選及對卵清蛋白致敏小鼠的抗過敏作用。 [目的]觀察金銀花中綠原酸、木犀草素和黃褐毛忍冬總皂苷的抗食物過敏作用。 [方法]建立雌性BALB/c小鼠食物過敏模型，分別以高、中、低濃度的綠原酸、木犀草素、黃褐毛忍冬總皂苷作用于過敏小鼠。采用ELISA法測定小鼠血清中OVA特異性IgE水平，以足墊腫脹實驗檢測遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH），篩選出金銀花中抗食物過敏的有效成分。進一步檢測該有效成分對空腸絨毛形態(tài)（

2、HE染色）、空腸和腸系膜肥大細胞（甲苯胺藍染色）以及小腸黏液中總IgA及OVA特異性IgA水平的影響。 [結(jié)果]綠原酸、木犀草素及中、低濃度的黃褐毛忍冬總皂苷用于食物過敏小鼠模型后對足墊腫脹反應(yīng)及血清中OVA特異性IgE未產(chǎn)生抑制作用。高濃度黃褐毛忍冬總皂苷可抑制小鼠足墊腫脹反應(yīng)，降低血清中OVA特異性IgE水平，緩解腸道及腸系膜中肥大細胞的聚集和脫顆粒現(xiàn)象，減輕小腸絨毛炎癥，但對小腸黏液總IgA和OVA特異性IgA無明顯影響。

3、 [結(jié)論]綠原酸、木犀草素對食物過敏無明顯治療作用。高濃度Ful可同時緩解食物過敏小鼠IgE介導(dǎo)的及細胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)。 第二部分黃褐毛忍冬總皂苷對卵清蛋白致敏小鼠脾臟T細胞功能亞群的影響。 [目的]觀察黃褐毛忍冬總皂苷對卵清蛋白致敏小鼠脾臟T細胞功能亞群的影響，以探討Ful的抗過敏機制。 [方法]建立雌性BALB/c小鼠食物過敏模型。取小鼠24只，均分為3組，即食物過敏組（FA）、藥物干預(yù)組（Ful）和

4、生理鹽水對照組（NS）。Ful組小鼠自第20日起每日皮下注射Ful200mg/kg，共22d。小鼠脾臟單個核細胞中加入OVA培養(yǎng)48小時。ELISA法檢測各組小鼠血清中OVA特異性IgE水平；流式細胞術(shù)檢測脾臟單個核細胞中CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞占CD4+T細胞比例；ELISA法檢測脾臟單個核細胞培養(yǎng)上清中IL-4、IFN-γ、IL-10水平。 [結(jié)果]食物過敏小鼠血清中OVA特異性IgE水平增高，脾臟CD4+

5、CD25+Foxp3+T細胞占CD4+T細胞比例與NS組無差別，脾臟單個核細胞培養(yǎng)上清中IL-4分泌增加，IFN-γ的產(chǎn)生與NS組無差別，IFN-γ/IL-4低于NS組。Ful干預(yù)后過敏小鼠OVA特異性IgE水平降低，CD4+CD25+Foxp3+T細胞占CD4+T細胞比例明顯增高，IL-4水平降低，IFN-γ/IL-4升高。IL-10產(chǎn)生水平各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 [結(jié)論]黃褐毛忍冬總皂苷可誘導(dǎo)OVA致敏小鼠脾臟中CD4+C

6、D25+Foxp3+T細胞，增強Treg反應(yīng)，并相對削弱Th2反應(yīng)，從而對IgE介導(dǎo)的超敏反應(yīng)起到緩解作用。 第三部分黃褐毛忍冬總皂苷對卵清蛋白致敏小鼠腸道炎癥因子和抗炎因子的影響。 [目的]觀察黃褐毛忍冬總皂苷對卵清蛋白致敏小鼠腸道炎癥因子和抗炎因子的影響。 [方法]建立雌性BALB/c小鼠食物過敏模型。取小鼠24只，均分為3組，即食物過敏組（FA）、藥物干預(yù)組（Ful）和生理鹽水對照組（NS）。Ful組小鼠自

7、第20日起每日皮下注射Ful200mg/kg，共22d。采用RT-PCR法檢測小鼠空腸組織中TGF-β1、IL-6、IL-17A、Foxp3、IL-10mRNA表達；免疫組織化學(xué)法檢測小鼠空腸組織中TGF-β1、IL-6、IL-17A蛋白表達；檢測空腸中髓過氧化物酶（MPO）活性代表中性粒細胞活化水平。 [結(jié)果]食物過敏小鼠空腸中TGF-β1、IL-6，IL-17A的mRNA和蛋白表達水平均增高，而Foxp3 mRNA表達下降。

8、經(jīng)Ful干預(yù)后，小鼠TGF-β1表達未下降，但IL-6、IL-17A表達水平均明顯降低，F(xiàn)oxp3mRNA表達明顯增高。IL-10 mRNA表達、空腸組織中髓過氧化物酶水平各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 [結(jié)論]食物過敏發(fā)生時腸道內(nèi)存在以IL-6、IL-17A表達增高為主的炎癥反應(yīng)。黃褐毛忍冬總皂苷可有效降低OVA致敏小鼠腸道炎癥因子IL-6、IL-17A的過度表達，并顯著增強CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3

9、的表達，這可能是黃褐毛忍冬總皂苷改善腸道炎性病理改變的機理之一。 第四部分黃褐毛忍冬總皂苷對卵清蛋白致敏小鼠肺部免疫狀態(tài)的影響。 [目的]觀察黃褐毛忍冬總皂苷對OVA致敏BALB/c小鼠肺部免疫狀態(tài)的影響。 [方法]取BALB/c雌鼠96只，均分為6組：食物過敏+PBS霧化吸入組（FA+AI-PB S）、食物過敏+OVA霧化吸入組（FA+AI-OVA）、食物過敏+PBS霧化吸入+Ful干預(yù)組（FA+AI-PBS+

10、Ful）、食物過敏+OVA霧化吸入+Ful干預(yù)組（FA+AI-OVA+Ful）、單純致敏+OVA霧化吸入組（Se+AI-OVA）及生理鹽水對照組（Control）。FA+AI-PBS和FA+AI-OVA組小鼠經(jīng)OVA致敏及灌胃激發(fā)，d41和d42分別給予PBS和OVA霧化吸入。Se+AI-OVA組未經(jīng)OVA灌胃激發(fā)，其余處理同F(xiàn)A+AI-OVA組。FA+AI-PBS+Ful組及FA+AI-OVA+Ful組給予高濃度Ful（200mg/k

11、g）皮下注射治療共22d，其余處理分別同F(xiàn)A+AI-PBS和FA+AI-OVA組。瑞氏一姬姆薩復(fù)合染色觀察支氣管肺泡灌洗液（BALF）中白細胞數(shù)及分類；肺組織HE染色進行氣道炎癥病理分析；免疫組織化學(xué)法觀察肺組織中TGF-β1、IL-6、IL-17A蛋白表達水平；檢測肺組織中髓過氧化物酶活性代表中性粒細胞活化水平。 [結(jié)果]FA+AI-PBS組小鼠支氣管肺泡灌洗液中細胞總數(shù)與分類計數(shù)與對照組無差異，肺部亦無明顯的炎細胞浸潤；FA

12、+AI-OVA組小鼠BALF中細胞總數(shù)增加，中性粒細胞、淋巴細胞百分比顯著增高，鏡下可見大量紅細胞，肺組織炎癥病理評分以及肺組織中TGF-β1、IL-6、IL-17A表達水平均明顯增高。Se+AI-OVA組小鼠肺組織炎癥病理評分低于FA+AI-OVA組，且肺部以嗜酸粒細胞浸潤為主，肺部TGF-β1、IL-6、IL-17A表達低于FA+AI-OVA組。黃褐毛忍冬總皂苷干預(yù)后吸入OVA的食物過敏小鼠肺部TGF-β1表達水平無明顯改變，炎癥因