M電流調(diào)節(jié)與大鼠SCG神經(jīng)元興奮性的關(guān)系.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)大鼠SCG神經(jīng)元，利用膜片鉗技術(shù)記錄神經(jīng)元動作電位和M通道電流，(1)觀察SCG神經(jīng)元興奮性及M電流的特征；(2)確定神經(jīng)元興奮性及M電流的關(guān)系(3)觀察NGF、Oxo-M和LP影響神經(jīng)元興奮性的特征；(4)初步探討NGF對M通道作用的機(jī)制。 方法：(1) SCG神經(jīng)元的分離與培養(yǎng)：取4-6周齡的SD大鼠，雌雄不限，迅速摘取其頸上神經(jīng)節(jié)，經(jīng)過剪切、消化、沈酶、重懸、種植等過程，生化培養(yǎng)箱37℃，5％CO<,2>+9

2、5％混合氣，培養(yǎng)1d后用于膜片鉗記錄。2d內(nèi)使用完。要求：無菌，低溫，操作迅速。(2)電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)：利用打孔膜片鉗技術(shù)和全細(xì)胞膜片技術(shù)，記錄神經(jīng)元動作電位和離子通道電流，給予Oxo-M、LP、NGF等，觀察這些藥物對神經(jīng)元興奮性和通道電流的作用并分析其作用機(jī)制。要求：①相同條件的灌流給藥和②嚴(yán)格有效的實(shí)驗(yàn)對照。 結(jié)果：(1) 根據(jù)在去極化電流的刺激下動作電位爆發(fā)的個數(shù)不同，大鼠SCG中存在三種具有不同電生理特征的神經(jīng)元，分別為

3、：phasic-1，只爆發(fā)一個動作電位，占36.4％；phasic-2，占53.5％，緊密爆發(fā)2～6個動作電位；tonic，持續(xù)爆發(fā)動作電位，占10.1％。說明SCG中以phasic神經(jīng)元為主。以動作電位爆發(fā)的個數(shù)為主要指標(biāo)，結(jié)合靜息電位、爆發(fā)的潛伏期及動作電位間期、靜息電位與閾電位的差值等4個方面對三類神經(jīng)元進(jìn)行比較，觀察它們興奮性的特點(diǎn)。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明：三類神經(jīng)元兩兩間比較動作電位爆發(fā)個數(shù)均存在顯著的差異(p<0.01)，相同條件下t

4、onic神經(jīng)元爆發(fā)的個數(shù)最多，phasic-2次之，phasic-1最少；phasic-1和phasic-2神經(jīng)元的靜息電位約-55mV，與tonic神經(jīng)元相比均存在顯著的差異(p<0.01)，后者的靜息電位較高，為-49.7mV；phasic-2和tonic動作電位爆發(fā)的間期存在顯著的差異(p<0.01)。說明tonic神經(jīng)元的興奮性較phasic神經(jīng)元高。(2)三類神經(jīng)元興奮性對遞增式注入電流的反應(yīng)性不同。Phasic-1神經(jīng)元在較

5、大幅度的電流(200pA～300pA)注入時不增加其動作電位的爆發(fā)個數(shù)；phasic-2神經(jīng)元在較小幅度的電流(10pA～100pA)注入時動作電位的爆發(fā)個數(shù)顯著增加，發(fā)放形式由phasic轉(zhuǎn)變?yōu)閠onic；tonic神經(jīng)元在微小幅度的電流(20pA～30pA)注入時即顯著增加動作電位的爆發(fā)個數(shù)，說明phasic-2和tonic神經(jīng)元對注入電流的敏感較高，反應(yīng)性較好，phasic-1神經(jīng)元的興奮性狀態(tài)較穩(wěn)定。(3)三類神經(jīng)元中M電流的大

6、小和電生理學(xué)特征不同。以-60mV的尾電流為指標(biāo)，phasic神經(jīng)元與tonic神經(jīng)元的M電流的大小存在顯著的差異(p<0.01)，后者的電流大小為33-7±3.36 pA(n=19)，僅為前者的1/3，說明Tonic神經(jīng)元的M電流較其它兩類神經(jīng)元小。Tonic神經(jīng)元的Ⅰ-Ⅴ曲線較其它phasic神經(jīng)元右移，去活和激活的時間常數(shù)也較phasic神經(jīng)元顯著增加(p<0.01)，說明tonic神經(jīng)元的M電流在較高的電壓下才能被激活，去活和激

7、活的時間較長。(4) 神經(jīng)元動作電位的爆發(fā)個數(shù)似乎與其M電流的大小有關(guān)，M電流較小，爆發(fā)個數(shù)則多；M電流較大，爆發(fā)個數(shù)則少，呈現(xiàn)一定的相關(guān)性。(5)Oxo-M和LP通過抑制M電流，可以不同程度地提高phasic和tonic神經(jīng)元的興奮性。對tonic神經(jīng)元影響最為顯著，phasic-2次之，phasic-1相對最不明顯。這可能與藥物對M電流的抑制率有關(guān)。(6)Oxo-M對phasic和tonic神經(jīng)元M電流的抑制率相同，均為75％左右，

8、說明神經(jīng)元興奮性的改變可能與其自身的興奮狀態(tài)和抑制后剩余的M電流的絕對大小有關(guān)。(7)NGF可以抑制SCG神經(jīng)元的M電流，但抑制程度遠(yuǎn)小于Oxo-M和LP對M電流的抑制，且長時間沖洗M電流不能從抑制中恢復(fù)。對phasic和tonic神經(jīng)元的抑制率沒有差異。(8)NGF可以提高tonic神經(jīng)元的興奮性，但對phasic神經(jīng)元的興奮性沒有影響。這可能與NGF對M電流的抑制率較低，抑制后phasic神經(jīng)元剩余的M電流的較大，仍可以維持其原來的

9、興奮性狀態(tài)有關(guān)。(9)在NGF抑制的基礎(chǔ)上，用Oxo-M加強(qiáng)對M電流的抑制程度，可以提高phasic神經(jīng)元的興奮性，進(jìn)一步說明M電流抑制程度的大小與神經(jīng)元改變興奮性關(guān)系密切。 結(jié)論： (1)大鼠SCG中存在phasic-1、phasic-2和tonic三種不同電生理類型的神經(jīng)元，以phasic神經(jīng)元為主。(2)phasic-1、phasic-2和tonic神經(jīng)元的興奮性及對電流刺激的敏感性和反應(yīng)性不同，tonic神經(jīng)元最高，p

10、hasic-2神經(jīng)元次之，phasic-1神經(jīng)元最低。(3)phasic-1、phasic-2和tonic神經(jīng)元M電流的大小和電生理學(xué)特征不同。Tonic神經(jīng)元的M電流較其它兩類神經(jīng)元小，Ⅰ-Ⅴ曲線右移，需在較高的電壓下才能被激活，去活和激活的時間常數(shù)均較長。(4)神經(jīng)元動作電位的爆發(fā)個數(shù)與其M電流的大小呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性。M電流較小，爆發(fā)個數(shù)則多，反之亦然。(5)Oxo-M和LP對phasic和tonic神經(jīng)元M電流的抑制率相同，抑制