血紅氧化酶-l對巨噬細胞活化因子清道夫受體的影響.pdf

1、背景：
　　冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病。巨噬細胞活化和泡沫細胞形成是動脈粥樣硬化（AS）發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵步驟。最新研究發(fā)現(xiàn)，CD163是只存在單核巨噬細胞膜上的跨膜分子，在炎癥刺激的作用下可從膜上脫落形成可溶性的CD163(sCD163)，而 sCD163被認(rèn)為是巨噬細胞活化的標(biāo)志?；罨木奘杉毎ㄟ^其表面的清道夫受體（如SR-A、CD36、CXCL16、CD68等）攝取ox-LDL，形成富含脂質(zhì)的泡沫細胞

2、，泡沫細胞堆積形成脂質(zhì)條紋或脂質(zhì)斑塊，最終導(dǎo)致AS的形成和發(fā)展。
　　血紅素氧化酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）是一種內(nèi)源性的催化血紅素分解的限速酶，它通過催化降解血紅素生成等摩爾的CO、膽紅素、游離鐵離子，從而發(fā)揮其抗氧化、抗炎、抑制血管內(nèi)膜增生和血管擴張的作用。前期研究發(fā)現(xiàn)，CAD患者外周血單個核細胞HO-1表達升高，且表達強度與臨床表型有關(guān)，說明HO-1在AS形成過程中發(fā)揮了有益的作用。但HO-1能否通過

3、調(diào)節(jié)巨噬細胞上sCD163和清道夫受體（SR-A、CD36、CXCL16、CD68）的表達，影響巨噬細胞活化和泡沫細胞的形成還尚未見報道。
　　目的：
　　本研究將采用人單核細胞系THP-1細胞為研究對象，通過構(gòu)建單核細胞來源性泡沫細胞模型，觀察HO-1對巨噬細胞活化標(biāo)志sCD163和清道夫受體（SR-A、CD36、CXCL16、CD68）的影響，探討HO-1在巨噬細胞活化和泡沫細胞形成中作用，為HO-1應(yīng)用于冠心病的預(yù)防和

4、治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.用含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人單核細胞系THP-1細胞，然后以100 nmol/L佛波酯（PMA）孵育48 h，誘導(dǎo)使其分化為巨噬細胞，倒置顯微鏡觀察巨噬細胞的形態(tài)，流式細胞儀檢測巨噬細胞膜上CD14的表達。
　　2.用地塞米松（DXM）與THP-1源性巨噬細胞孵育24小時，使其膜上的CD163表達最大化，再用不同濃度LPS(10、100、1000、100

5、00 pg/mL)脂多糖（LPS）作用1小時，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測和流式細胞儀分別檢測LPS對sCD163和CD163的影響。
　　3.分別用HO-1誘導(dǎo)劑CoPP IX和HO-1抑制劑ZnPP IX預(yù)處理CD163高表達的THP-1源性巨噬細胞12小時后，再用1 ng/ml的LPS刺激1小時，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測和流式細胞儀分別檢測HO-1對LPS誘導(dǎo)的sCD163和CD163表達的影響。
　　

6、4.用不同濃度（0、25、50、100mg/L）ox-LDL與THP-1源性巨噬細胞共同孵育24小時，或用100mg/L的ox-LDL作用不同時間（0、12h、24h、48h），油紅O染色觀察巨噬細胞源性泡沫細胞形態(tài)，蛋白免疫印跡（Western Blot）方法檢測ox-LDL刺激后對清道夫受體（SR-A、CD36、CXCL16、CD68）和HO-1蛋白表達的影響。
　　5.分別用HO-1誘導(dǎo)劑CoPP IX和HO-1抑制劑ZnP

7、P IX預(yù)處理THP-1源性巨噬細胞12小時后，再用100 mg/L的ox-LDL孵育24小時，蛋白免疫印跡（Western Blot）方法檢測HO-1對ox-LDL誘導(dǎo)的清道夫受體（SR-A、CD36、CXCL16、CD68）蛋白表達的影響。
　　結(jié)果：
　　1. PMA可使大部分的THP-1單核細胞誘導(dǎo)為巨噬細胞，并進一步與ox-LDL孵育后可形成泡沫細胞。
　　2. LPS能引起THP-1巨噬細胞膜上CD163的

8、脫落，即使細胞培養(yǎng)液中sCD163的生成增多，巨噬細胞膜上CD163的表達減少。
　　3.誘導(dǎo)HO-1高表達能抑制LPS誘導(dǎo)的CD163的脫落，即增加巨噬細胞膜上CD163的表達，減少細胞培養(yǎng)液中的sCD163的生成。
　　4. ox-LDL能誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細胞內(nèi)HO-1的表達，并呈時間和濃度依賴性。
　　5. ox-LDL能增加THP-1源性巨噬細胞膜上清道夫受體（SR-A、CD36、CXCL16、CD68）