慢性阻塞性肺疾病比較蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)非COPD不吸煙者（對(duì)照組）、非COPD吸煙者（吸煙組）、吸煙COPD患者（COPD組）肺組織表達(dá)的蛋白質(zhì)組進(jìn)行比較。尋找差異表達(dá)蛋白，以期為揭示COPD的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制提供新的線索。
　　方法：收集因肺癌行肺葉切除的對(duì)照組、吸煙組、COPD組的肺組織標(biāo)本各24例（其中吸煙組與COPD組的吸煙指數(shù)無(wú)顯著性差異），提取組織總蛋白，各組內(nèi)按照隨機(jī)每6例構(gòu)建一個(gè)蛋白池。對(duì)每一個(gè)蛋白池進(jìn)行雙向凝膠電泳（2-DE），通過(guò)對(duì)凝膠進(jìn)

2、行圖像掃描獲取2-DE圖像，利用PDQUEST軟件對(duì)3組研究對(duì)象的2-DE圖像進(jìn)行比較分析，識(shí)別出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。從凝膠中切取差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，TPCK-Trypsin酶解后進(jìn)行MOLDI-TOF-MS分析，獲取肽質(zhì)量指紋圖譜，借助于Mascot Distiller/Mascot Wizard軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。對(duì)鑒定的部分代表性的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色和Western blot檢測(cè)，一方面驗(yàn)證蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，另一方面

3、對(duì)蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定位和半定量分析。
　　結(jié)果：
　　1.對(duì)照組、吸煙組、COPD組的肺組織蛋白質(zhì)組進(jìn)行2-DE分別分離出775±38、641±33、729±21個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。通過(guò)對(duì)3組研究對(duì)象的2-DE圖像進(jìn)行比較分析，共找到表達(dá)差異大于1.5倍的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)47個(gè)。通過(guò)對(duì)47個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定，共鑒定出24種蛋白質(zhì)，功能主要涉及基本代謝酶類(lèi)、氧化應(yīng)激蛋白、凝血/纖溶相關(guān)蛋白、蛋白降解相關(guān)酶及細(xì)胞生

4、長(zhǎng)分化相關(guān)蛋白等，其中21種蛋白在COPD肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究中未見(jiàn)報(bào)道。與對(duì)照組相比，22種蛋白質(zhì)在吸煙組表達(dá)上調(diào)，在COPD組表達(dá)水平進(jìn)一步增高。
　　2．免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：HSP27蛋白表達(dá)于肺內(nèi)各種類(lèi)型細(xì)胞，Cathepsin D主要表達(dá)于肺泡結(jié)構(gòu)區(qū)域，PPIA及D4-GDI表達(dá)于除支氣管上皮細(xì)胞以外的各種肺組織細(xì)胞，3組間的表達(dá)強(qiáng)度變化趨勢(shì)與蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果一致。
　　3．Western blot檢測(cè)結(jié)果

5、顯示：與不吸煙者相比較，HSP27、Cathepsin D、PPIA、D4-GDI在吸煙者肺組織表達(dá)上調(diào)，COPD患者較非COPD吸煙者表達(dá)水平進(jìn)一步增高。3組間的表達(dá)強(qiáng)度變化趨勢(shì)與蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　1.通過(guò)對(duì)對(duì)照組、吸煙組及COPD組進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)比較分析，成功鑒定了24種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，主要為基本代謝酶類(lèi)、凝血/纖溶相關(guān)蛋白質(zhì)、氧化應(yīng)激相關(guān)酶類(lèi)、蛋白降解相關(guān)酶以及細(xì)胞生長(zhǎng)分化相關(guān)蛋白質(zhì)。