不同毒力新城疫毒株誘導腫瘤細胞凋亡機制差異分析.pdf

1、溶瘤病毒是一類能特異在腫瘤細胞中復制并最終殺死腫瘤細胞的病毒。盡管新城疫病毒(New Castle Disease virus，NDV)是以禽類為天然宿主的病毒，但其已被多項研究證實是一種安全有效的溶瘤病毒，目前已有多種新城疫毒株用于臨床研究。研究表明凋亡可能作為新城疫病毒溶瘤機制之一在溶瘤過程起重要作用，但對不同NDV毒株在溶瘤治療機制方面研究不夠深入。本實驗選取NDV-FMW、NDV-BC和NDV-LaSota分別作為強毒、中毒和弱

2、毒的代表毒株，以肺腺癌A549細胞為模型，研究了不同毒株在溶瘤效力、復制能力、凋亡誘導能力及機制等方面的差異。
　　 方法：1.MTT法篩檢測不同毒力毒株以不同濃度作用細胞24h、48h、72h后的溶瘤效率。2.Western Blot檢測病毒感染腫瘤細胞后凋亡途徑相關蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12及MAPK通路蛋白JNK、p38、ERK等的活化。
　　 結

3、果：本研究結果表明不同毒力毒株在溶瘤效力、復制能力、凋亡誘導能力及機制方面存在差異。 分別以不同MOI(0.1，1，10)病毒感染肺腺癌A549細胞，感染24h、48h、72h時以MTT法檢測細胞死亡率，實驗結果顯示溶瘤效率方面，強毒＞中毒＞弱毒，此外強毒和中毒溶瘤效率隨感染時間增加逐漸增強，而弱毒溶瘤效率隨感染時間變化不明顯，三種病毒溶瘤效率均與病毒使用劑量里正相關。病毒復制能力檢測結果表明，強毒與中毒在A549細胞中顯著增殖，但未檢

4、測到弱毒的增殖。對凋亡通路的研究結果表明，三種病毒分別感染細胞后均能同時活化Caspase8、Caspase9、Caspase3及裂解PARP蛋白，表明外源性及內源性凋亡途徑同時參與病毒毒介導的細胞凋亡，而作為內質網應激途徑的標志性蛋白，Caspase12的活化情況與對照無明顯變化。MAPK通路的主要蛋白磷酸化水平均有所升高，其中P-JNK磷酸化在病毒感染12h時有明顯升高，P38磷酸化水平與對照相比顯著升高，Erk1/2磷酸化水平除強