新城疫現(xiàn)地分離株基因型分析和復(fù)合滅活疫苗研制.pdf

1、1999年和2002年從河北、黑龍江疑似新城疫雞的病料中經(jīng)雞胚分離到4株病毒,分別命名為HeB-4-99、HeB-5-99、HeB-6-02和HLJ-10-02,各毒株均在48~72h致雞胚死亡.死亡雞胚的尿囊液有血凝活性,并且可被NDV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清所抑制.復(fù)歸雞試驗(yàn)可見(jiàn)發(fā)病雞出現(xiàn)典型新城疫癥狀和病理變化,而且可以分離出病毒,鑒定分離毒株為新城疫病毒.經(jīng)致病性指數(shù)(ICPI、MDT)測(cè)定結(jié)果表明,分離株為新城疫強(qiáng)毒株.對(duì)F基因部分片段克

2、隆及核苷酸序列測(cè)定結(jié)果表明,4個(gè)毒株F蛋白的裂解位點(diǎn)氨基酸組成為<'112>RRQKRF<'117>,具有強(qiáng)毒株裂解位點(diǎn)氨基酸組成特點(diǎn),與ICPI和MDT測(cè)定結(jié)果相吻合;核苷酸序列同源性分析顯示,4株分離毒株核苷酸序列具有95.9％~100％的同源性,與La Sota的核苷酸序列同源性為81.0％~81.8％,與F48E9的核苷酸序列同源性達(dá)85.8％~89.3％.選擇起始密碼子開(kāi)始的1-374bp核苷酸序列,對(duì)該試驗(yàn)的4個(gè)毒株和國(guó)內(nèi)現(xiàn)

3、已克隆測(cè)序的NDV毒株以及國(guó)外部分毒株共73株繪制基因系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù),結(jié)果表明HeB-4-99,HeB-5-99、HeB-6-02和HLJ-10-02歸屬于基因Ⅶ型.采用分離的基因Ⅶ型的NDV毒株與La Sota株制成復(fù)合滅活疫苗,并分別以La Sota株滅活疫苗、復(fù)合滅活疫苗以及復(fù)合滅活疫苗與La Sota株活疫苗聯(lián)合免疫試驗(yàn)雞,進(jìn)行免疫保護(hù)力比較試驗(yàn).結(jié)果表明,各組免疫雞強(qiáng)毒攻擊后均能獲得保護(hù),但在測(cè)定免疫雞HI抗體時(shí),發(fā)現(xiàn)復(fù)合滅活