多孔絲素材料修復大鼠真皮缺損過程中成纖維細胞CD90表達及其生物學特性.pdf

1、目的：為深入研究絲素蛋白在修復大鼠皮膚缺損過程中的作用機理，用免疫組織化學方法分別檢測CD90、’FGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原在天蠶絲素材料、家蠶絲素材料和海綿材料修復大鼠皮膚缺損過程中的表達水平，探討材料對主要修復細胞的影響，分析成纖維細胞CD90表達及其增殖、合成、收縮等功能的相關性。
　　 方法：1、雄性SD清潔級大鼠144只，隨機分為3組。A組為天蠶絲素材料組，n=48；B組為家蠶絲素材料組，n=48；C組為海

2、綿材料組，n=48；應用3組材料復合大鼠自體刃厚皮片修復大鼠背部皮膚缺損（2cm×2cm）。分別在術后5d、10d、15d和25d各組取材，標本固定，石蠟包埋，組織切片，HE染色。2、根據(jù)HE染色結果確定取材部位，每個組織蠟塊中選取1個采樣點，不同時間點分別構建4塊組織芯片蠟塊，陣列均為6×6。每塊芯片包含同一時間點的36點組織標本。3、組織芯片行免疫組織化學染色，檢測CD90、TGF-β1、α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原在不同時間點各組材料

3、修復大鼠皮膚缺損過程中的表達水平，將所得結果進行統(tǒng)計學分析。4、分析成纖維細胞CD90表達與TGF-β1/α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原4種蛋白表達的相關性。
　　 結果：1、移植術后A、B兩組復合皮片生長良好、全部存活；C組移植皮片大部分變黑、結痂，并有脫落。2、成功構建絲素蛋白材料修復大鼠皮膚缺損實驗的組織芯片，用于免疫組化染色。3、免疫組織化學染色顯示術后第10d、15d時A、B兩組CD90陽性成纖維細胞表達較多，25d時有所下

4、降，A、B兩組相比無顯著意義（P>0.05）；與C組相比較差異均有顯著意義（P<0.05）。4、TGFβ1和α-SMA在A、B兩組中術后5d少量表達，而在第10d、15d時TGF-β1、α-SMA均有較高程度表達，25d時表達降低，兩者相比無顯著意義（P>0.05），兩者與C組相比較均有非常顯著意義（P<0.05）。5、術后25d時A、B兩組中Ⅰ、Ⅲ膠原表達較多，兩者比較均無顯著意義（P>0.05），與C組比較有顯著意義（P<0.05）

5、。6、統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)A、B兩組中成纖維細胞CD90表達和TGF-β1、α-SMA表達具有相關性。
　　 結論：1、天蠶絲素和家蠶絲素作為真皮支架材料沒有明顯差別，移植后局部炎性反應均較輕，具有良好的組織相容性，都可用作真皮缺損的修復材料。2、組織芯片具有效率高、質控好的優(yōu)點，適合多因素比較研究，可用于修復大鼠真皮缺損的相關實驗研究。3、絲素蛋白支架材料作為真皮模板早期能誘導創(chuàng)面周圍和基底的成纖維細胞長入，后期可使CD90陽性成纖