小鼠腎腫瘤細胞的力學特性研究.pdf

1、細胞牽引力(Cell Traction Force):是細胞作用于細胞外基質(zhì)的力。它是由肌動球蛋白的相互作用和肌動蛋白的聚合作用而產(chǎn)生的，細胞牽引力受α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)調(diào)控，并通過黏著斑作用于細胞外基質(zhì)。細胞牽引力做為一個重要的物理學參數(shù)，與細胞的許多生物過程有著密切的關系，它對細胞的貼壁、移動、形態(tài)和信號傳導等過程具有明顯影響。通過研究小鼠腎腫瘤細胞的力學特性在細胞癌變過程中的變化規(guī)律，探索小鼠腎細胞牽引力的表達變化機制

2、。
　　目的:通過觀察小鼠腎腫瘤細胞在誘導分化前后細胞牽引力和α-SMA蛋白的含量的變化，同時和正常小鼠腎細胞的參數(shù)進行比較，探索小鼠腎腫瘤細胞在分化過程中牽引力與α-SMA的變化規(guī)律，從而探明細胞在生長、發(fā)育和病變過程中細胞牽引力的變化機制，對基礎生物學做一些探索性研究。
　　方法與結(jié)論:1.細胞的培養(yǎng)。通過消化法獲取小鼠腎細胞與腎腫瘤細胞后，置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)3～4d換液，去除未貼壁的細胞。用倒置顯微鏡觀察細胞

3、生長狀態(tài)，待多數(shù)細胞形成較好的集落時，制成細胞玻片，其余部分繼續(xù)培養(yǎng)備用。
　　2.鬼筆環(huán)肽對微絲的特異性染色。利用鬼筆環(huán)肽與微絲的特異性結(jié)合的特點，對胞內(nèi)微絲進行特異性染色，以觀察比較小鼠腎正常細胞與腎腫瘤細胞內(nèi)微絲分布特征的變化。結(jié)果顯示小鼠腎腫瘤細胞內(nèi)微絲分布無序，結(jié)構(gòu)散亂，與腎正常細胞相比變化較大，說明細胞癌變后，細胞骨架結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著變化，這與腫瘤細胞的生理特性相適應。
　　3.使用CTFM法進行細胞牽引力測定。C

4、TFM基本原理是根據(jù)細胞基質(zhì)彈性表面變形程度來進行測算細胞牽引力的技術。根據(jù)細胞的大小不同置備不同硬度的彈性基質(zhì)，在制備彈性基質(zhì)時摻入熒光微珠，方便確定基質(zhì)的變形程度。將細胞種植于彈性基質(zhì)表面，當細胞依附在基質(zhì)表面后會使基質(zhì)產(chǎn)生變形。先用熒光顯微鏡的普通光源拍攝一張細胞圖片，再用熒光光源拍攝基質(zhì)圖片，然后使用1滴1M的NaOH將細胞殺死，使其脫離變形的基質(zhì)表面，待彈性基質(zhì)恢復原形后，拍攝第二張基質(zhì)圖片。在MATLAB7.0軟件上運行專用

5、程序，測算出細胞誘導分化前后的細胞牽引力。
　　結(jié)果顯示，小鼠腎腫瘤細胞經(jīng)過誘導分化后，其細胞牽引力明顯變大，平均值由281pa增加到550pa，增加了大約一倍左右，經(jīng)過測算細胞投影表面積平均值由695um2增加到955um2，大約增加了37％，小鼠腎腫瘤細胞的最大牽引力由1200pa增加到1700pa。
　　4.使用免疫印跡法檢測α-SMA蛋白含量。
　　用蛋白質(zhì)免疫印跡法測定小鼠正常腎細胞及腎腫瘤細胞誘導分化前后細