根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的胡蘿卜愈傷組織細胞表達人干擾素α-2b的研究.pdf

1、目的：將人干擾素α-2b(human interferonα-2b,hIFNα-2b)基因?qū)牒}卜愈傷組織細胞，探討植物細胞表達hIFNα-2b的可行性。
　　方法：將已構(gòu)建成功并保存于大腸桿菌DH5α中的人干擾素α-2b基因植物雙元表達載體pBI121-hIFNα-2b以凍融法轉(zhuǎn)化根瘤農(nóng)桿菌LBA4404感受態(tài)細胞，經(jīng)過卡那霉素和利福霉素的雙重篩選，選出陽性菌落，并經(jīng)PCR鑒定質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化。利用植物離體培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)胡蘿卜愈傷組

2、織細胞，并通過根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法，用含有質(zhì)粒 pBI121-hIFNα-2b的農(nóng)桿菌感染胡蘿卜愈傷組織細胞，經(jīng)卡那霉素和頭孢霉素雙重篩選，選出轉(zhuǎn)基因陽性細胞。利用RT-PCR、Western Blotting檢測陽性細胞中hIFNα-2b基因的表達產(chǎn)物。
　　結(jié)果：經(jīng)RT-PCR與Western Blotting檢測，轉(zhuǎn)基因陽性細胞中存在hIFNα-2b基因的表達產(chǎn)物。
　　結(jié)論：本研究成功將hIFNα-2b基因?qū)?/p>